本文關鍵詞：反向斑點雜交技術快速檢測結(jié)核分枝桿菌八種藥物耐藥性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：耐藥結(jié)核病尤其是耐多藥結(jié)核病(multi-drug resistant tuberculosis,MDR-TB,)及廣泛耐藥結(jié)核病(extensively drug resistant tuberculosis,XDR-TB,)的出現(xiàn)和流行成為了全球重點關注的公共衛(wèi)生問題及社會問題。長期以來,以細菌培養(yǎng)為基礎的傳統(tǒng)藥敏試驗被視為金標準廣泛應用于臨床,但其耗時長,結(jié)核病患者在初期得不到及時有效的治療而延誤病情。新興的分子生物學方法在部分一線抗結(jié)核藥物中已經(jīng)取得了良好的檢測效果,幾乎可以與表型藥敏試驗相媲美,但它們需要特殊的儀器試劑,且在二線藥物檢測中應用較少。而反向斑點雜交(Reverse dot blot hybridization,RDBH)是一種基于基因擴增上的分子雜交技術,具有快速、簡便、高效、直觀等特點。本研究旨在建立一種能同時檢測結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)對四種一線和四種二線抗結(jié)核藥物耐藥性的RDBH技術,以實現(xiàn)耐藥結(jié)核病的全面快速檢測,為有效防治耐藥結(jié)核病提供新的技術手段。分別針對結(jié)核分枝桿菌八種藥物,包括四種一線抗結(jié)核藥抗結(jié)核藥異煙肼(Isoniazid,INH)、利福平(Rifampicin,RIF)、鏈霉素(Streptomycin,SM)、乙胺丁醇(Ethambutol,EMB)和四種二線抗結(jié)核藥氧氟沙星(Ofloxacin,OFX)、卡那霉素(Kanamycin,KAN)、阿米卡星(Amikacin,AMK)、卷曲霉素(Capreomycin,CPM),主要耐藥相關基因及常見的突變位點,設計合成46條氨基標記的特異性寡核苷酸探針。通過小樣本試驗優(yōu)化RDBH技術條件,建立RDBH技術,并對326株和170株MTB臨床分離株分別進行一線、二線抗結(jié)核藥物耐藥性檢測,采用比例法藥敏試驗和DNA測序結(jié)果作對照,初步評價該技術的檢測效能。經(jīng)過實驗條件的反復優(yōu)化,最終確定了探針序列、探針終濃度為0.5?M、雜交鹽離子濃度為5×SSPE/0.1%SDS、最適雜交溫度60℃、洗膜溫度50℃、POD-TMB為顯色體系。同時應用比例法藥敏試驗、DNA測序和RDBH技術分別對326株和170株MTB臨床分離株進行了INH、RIF、SM、EMB四種一線抗結(jié)核藥物和OFX、KAN、AMK、CPM四種二線抗結(jié)核藥物的耐藥性檢測,以比例法作參照,RDBH檢測INH、RIF、SM、EMB、OFX、KAN、AMK和CPM的敏感度分別為84.5%(185/219)、86.5%(166/192)、72.3%(120/166)、55.4%(51/92)、62.8%(59/94)、56.0%(14/25)、61.5%(8/13)和45.0%(9/20);特異度分別為95.3%(102/107)、95.5%(128/134)、91.3%(146/160)、82.1%(192/234)、100.0%(76/76)、100.0%(145/145)、98.7%(155/157)和99.3%(149/150);Kappa值分別為0.75、0.80、0.63、0.37、0.60、0.68、0.57和0.37;以DNA測序為為參照,八種藥物耐藥性檢出率分別為97.9%(189/193)、97.7%(171/175)、97.8%(134/137)、82.0%(91/111)和93.7%(59/63)、92.9%(13/14)、90.0%(9/10)、90.0%(9/10);特異度分別為99.2%(132/133)、97.4%(148/152)、100.0%(189/189)、99.1%(213/215)和100.0%(107/107)、99.4%(155/156)、99.4%(159/160)、99.4%(159/160);Kappa值分別為0.97、0.96、0.98、0.84、0.95、0.92、0.89和0.89。本研究建立的反向斑點雜交技術對結(jié)核分枝桿菌八種藥物的耐藥性具有良好檢測效果,為開發(fā)快速檢測耐藥性試劑盒奠定基礎,在結(jié)核病一、二線八種抗結(jié)核藥物耐藥性檢測和監(jiān)測上具有良好的應用前景。
【關鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 反向斑點雜交技術 耐藥性 耐藥相關基因
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R378.911
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 縮略詞12-14
• 第1章 緒論14-18
• 第2章 材料與方法18-34
• 2.1 實驗材料18-21
• 2.2 實驗方法21-34
• 第3章 結(jié)果34-66
• 3.1 反向斑點雜交技術檢測結(jié)核分枝桿菌耐藥性條件的建立與優(yōu)化34-40
• 3.2 一線抗結(jié)核藥物耐藥性試驗檢測結(jié)果40-55
• 3.3 二線抗結(jié)核藥物耐藥性試驗檢測結(jié)果55-66
• 第4章 討論66-76
• 4.1 目前MTB藥物敏感性試驗方法比較分析66
• 4.2 反向斑點雜交技術檢測MTB耐藥性條件優(yōu)化66-67
• 4.3 反向斑點雜交技術快速檢測結(jié)核分枝桿菌一線藥物耐藥性67-71
• 4.4 反向斑點雜交技術快速檢測結(jié)核分枝桿菌二線藥物耐藥性71-76
• 第5章 結(jié)論76-78
• 參考文獻78-84
• 文獻綜述84-96
• 參考文獻92-96
• 作者攻讀學位期間的科研成果96-97
• 資助本論文的科研項目97-98
• 致謝98

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李勇軍 ,李少俠 ,張玉振 ,丁娟 ,王娜;骨傷感染中耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌耐藥性檢測[J];中醫(yī)正骨;2002年05期

2 朱光明;從宏亮;;臨床分離的洋蔥伯克霍爾德菌的耐藥性分析[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年13期

3 王洪波,桂清榮,申正義,劉波波;兒科感染致病菌814株耐藥性檢測[J];新醫(yī)學;2000年04期

4 葛超榮,林瑞炮;結(jié)核分枝桿菌耐藥機制及耐藥性檢測的研究進展[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2001年02期

5 金法祥 ,李水法;紹興市甲型副傷寒沙門菌耐藥性檢測[J];醫(yī)學文選;2001年05期

6 溫曉崢,李智潮;176株福氏2a型志賀氏菌耐藥性檢測[J];四川省衛(wèi)生管理干部學院學報;2002年01期

7 楊坤,李敬云;人類免疫缺陷病毒1型耐藥性檢測方法及其應用進展[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2005年07期

8 應英;海島漁民甲型副傷寒沙門菌耐藥性監(jiān)測[J];江西醫(yī)學檢驗;2005年02期

9 狄云湘;應英;;某海島甲型副傷寒沙門菌耐藥性監(jiān)測[J];上海預防醫(yī)學雜志;2006年10期

10 朱燕飛;;女性生殖道支原體感染及耐藥性分析[J];浙江預防醫(yī)學;2008年10期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 尚旭明;王海燕;;耐甲氧西林葡萄球菌的耐藥性分析[A];中華醫(yī)學會第七次全國檢驗醫(yī)學學術會議資料匯編[C];2008年

2 李羲;;肺癌耐藥性檢測與克服耐藥性策略[A];中華醫(yī)學會第五屆全國胸部腫瘤及內(nèi)窺鏡學術會議論文匯編[C];2011年

3 張健源;李傳友;程君;;應用改良的耐藥性檢測法觀察結(jié)核分枝桿菌耐藥的動態(tài)變化[A];中華醫(yī)學會結(jié)核病學分會2010年學術年會論文匯編[C];2010年

4 葉衛(wèi)紅;劉翠銀;;268例革蘭陰性桿菌肺炎的病原菌分布及耐藥性監(jiān)測[A];湖北省暨武漢市微生物學會分析微生物專業(yè)委員會第十屆第五次學術會議論文匯編[C];2008年

5 王春光;張鐵;韓偉;翟向和;李清艷;呂建存;;禽致病性大腸埃希菌的分離鑒定與耐藥性監(jiān)測[A];京津冀畜牧獸醫(yī)科技創(chuàng)新交流會暨新思想、新觀點、新方法論壇論文集[C];2008年

6 管婧;卓超;蘇丹虹;李紅玉;;耐甲氧西林金黃色葡萄球菌耐藥性及基因分型分析[A];第8屆全國抗菌藥物臨床藥理學術會議暨北京大學臨床藥理研究所成立三十周年論文集[C];2010年

7 楊華;胡忠義;;變性高效液相色譜在結(jié)核分枝桿菌耐藥性檢測中的應用研究[A];2006中國防癆協(xié)會全國學會會議論文集[C];2006年

8 肖二輝;石娜;陳永平;;2003-2008年我院細菌耐藥性變化的分析[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學學術年會論文匯編[C];2009年

9 郭瑞林;蘇冰;王小華;任忠良;張曉雪;;咸陽地區(qū)醫(yī)院細菌感染發(fā)生率與耐藥性監(jiān)測研究[A];中華醫(yī)學會第七次全國檢驗醫(yī)學學術會議資料匯編[C];2008年

10 谷海瀛;;Helicobacter pylori分離培養(yǎng)鑒定分型及耐藥性檢測研究[A];中華醫(yī)學會第七次全國檢驗醫(yī)學學術會議資料匯編[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所 韓喜琴;RFP和RBT耐藥性與rpoB突變有關[N];中國醫(yī)藥報;2011年

2 ;中國建立基因型分析方法[N];中國高新技術產(chǎn)業(yè)導報;2002年

3 趙喜明;耐藥細菌叫板聲急[N];中國醫(yī)藥報;2004年

4 于海源;細菌對消毒劑也產(chǎn)生耐藥性[N];中國醫(yī)藥報;2000年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 孫慧涌;自由能計算方法在耐藥性機制分析和遺傳病治療中的應用[D];蘇州大學;2015年

2 蘇齊鑒;廣西HIV-1耐藥性及關聯(lián)因素研究與主要流行株亞型快速鑒定方法的建立[D];廣西醫(yī)科大學;2009年

3 賈崢;HIV-1表型耐藥以及基因型耐藥的檢測與分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2010年

4 王秀英;葡萄提取物消除大腸桿菌耐藥性的研究[D];四川大學;2006年

5 張強;副豬嗜血桿菌喹諾酮耐藥分子特征及豬鏈球菌多重耐藥機制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方爽;延邊部分地區(qū)犬源腹瀉致病菌的分離鑒定及耐藥性分析[D];延邊大學;2015年

2 張金寶;寧夏地區(qū)牛源大腸桿菌優(yōu)勢血清型和毒力基因檢測及耐藥性分析[D];寧夏大學;2015年

3 錢海英;聊城地區(qū)臨床分離主要病原菌的分布特征及耐藥性[D];山東大學;2015年

4 曹蘊;130例表皮葡萄球菌臨床分離株的耐藥性分析和mecA/icaA/icaD基因研究[D];安徽醫(yī)科大學;2014年

5 王穎;白城地區(qū)動物源鏈球菌耐藥性檢測及優(yōu)化臨床用藥方案的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2015年

6 盧婷;牛源大腸桿菌耐藥性和耐藥基因檢測及對喹諾酮類藥物防突變濃度的測定[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2015年

7 張曉丹;豬舍環(huán)境大腸桿菌耐藥性及其向周邊環(huán)境傳播的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2015年

8 杜文燕;重癥監(jiān)護病房呼吸機相關性肺炎與非呼吸機相關性肺炎病原菌及耐藥性的分析比較[D];青島大學;2015年

9 郭倩;反向斑點雜交技術快速檢測結(jié)核分枝桿菌八種藥物耐藥性的研究[D];南華大學;2015年

10 張愛民;不同來源乳酸菌的耐藥性分析及藥敏性乳酸菌的應用[D];揚州大學;2008年

  本文關鍵詞：反向斑點雜交技術快速檢測結(jié)核分枝桿菌八種藥物耐藥性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：296385