本文關(guān)鍵詞：體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞α7尼古丁型乙酰膽堿能受體調(diào)控β-淀粉樣蛋白聚集的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究激活星形膠質(zhì)細胞內(nèi)的α7尼古丁乙酰膽堿能受體(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)后對調(diào)控β-淀粉樣蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)聚集的作用。方法:分離新生大鼠大腦皮質(zhì),培養(yǎng)原代星形膠質(zhì)細胞并純化、傳代,使用細胞免疫熒光的方法鑒定細胞及純度;體外制備Aβ寡聚體;將培養(yǎng)細胞分為對照組、激動劑組、拮抗劑+激動劑組以及Aβ組、激動劑+Aβ組、拮抗劑+激動劑+Aβ組。激動劑有尼古丁、PNU、s24795,拮抗劑為甲基牛扁亭(methyllycaconitine,MLA)。用蛋白印跡法(Western blotting)和逆轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription,PCR)法檢測正常星形膠質(zhì)細胞內(nèi)nAChR不同亞單位的表達;蛋白印跡法和凝膠銀染方法鑒定Aβ寡聚體聚集情況;用CCK-8方法測定星形膠質(zhì)細胞的存活率;使用蛋白印跡法檢測加入激動劑后α7 nAChR的表達以及Aβ蛋白是否降解。結(jié)果:采用免疫熒光法鑒定所培養(yǎng)的細胞,結(jié)果顯示星形膠質(zhì)細胞占所有細胞的95%以上。除β3外,星形膠質(zhì)細胞中α2、α3、α4、α7及β2 nAChR亞單位在蛋白及mRNA水平均有表達。體外制備的Aβ除了含少量的未聚集的單體(4 kDa)外,主要以二聚體、三聚體、九聚體等不同聚集形式的寡聚體存在;CCK-8方法顯示Aβ寡聚體對星形膠質(zhì)細胞有明顯的神經(jīng)毒性作用,并呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系。檢測α7 nAChR蛋白表達結(jié)果顯示:(1)尼古丁組與對照組比較,尼古丁組的α7 nAChR表達明顯增高(P0.01),MLA+尼古丁組與尼古丁組比較,加入拮抗劑組的α7 nAChR表達降低(P0.05);(2)PNU組與對照組比較,PNU組的α7 nAChR的表達增加(P0.05),MLA+PNU組與PNU組相比,α7 nAChR表達降低(P0.05);(3)s24795組與對照比較,s24795組的α7 nAChR表達明顯升高(P0.01),MLA+s24795組與s24795組比較,加入拮抗劑組的α7 nAChR表達明顯降低(P0.01)。檢測Aβ蛋白的表達結(jié)果為:(1)收集細胞的上清液及蛋白,分別進行檢測。對照組正常的細胞內(nèi)沒有Aβ蛋白的表達,尼古丁+Aβ組與Aβ組相比,尼古丁+Aβ組的Aβ蛋白表達均明顯降低(P0.01),MLA+尼古丁+Aβ組與尼古丁+Aβ組比較,MLA+尼古丁+Aβ組的Aβ蛋白的表達均明顯升高(P0.01);(2)收集細胞的上清液及蛋白,分別進行檢測。對照組正常的細胞內(nèi)沒有Aβ蛋白的表達,PNU+Aβ組與Aβ組相比,PNU+Aβ組的蛋白表達均明顯降低(P0.01),MLA+PNU+Aβ組與PNU+Aβ組比較,MLA+PNU+Aβ組的蛋白表達均升高(P0.05);(3)收集細胞的上清液及蛋白,分別進行檢測。對照組正常的細胞內(nèi)沒有Aβ蛋白的表達,s24795+Aβ組與Aβ組相比,s24795+Aβ組的Aβ蛋白表達均明顯降低(P0.01),MLA+s24795+Aβ組與s24795+Aβ組比較,MLA+s24795+Aβ組的Aβ蛋白的表達均明顯升高(P0.01)。結(jié)論:Aβ寡聚體對星形膠質(zhì)細胞有明顯的神經(jīng)毒性作用。在星形膠質(zhì)細胞有多種nAChRs亞單位的表達。細胞實驗中,使用三種不同的激動劑刺激星形膠質(zhì)細胞內(nèi)α7 nAChR,均能夠上調(diào)α7 nAChR的表達量。星形膠質(zhì)細胞內(nèi)的α7 nAChR表達量上調(diào),可能通過協(xié)同細胞自身的吞噬作用以及分泌降解酶的作用,降解Aβ。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s disease AD) β-淀粉樣蛋白 寡聚體 星形膠質(zhì)細胞 α7 nAChR
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 略縮詞表9-10
• 引言10-13
• 材料與方法13-22
• 結(jié)果22-30
• 討論30-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-43
• 綜述43-52
• 參考文獻50-52
• 作者簡歷52-53
• 致謝53-54
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集54

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本文編號：293198