發(fā)布時間：2017-03-30 18:00

  本文關鍵詞：Caspase-1介導糖原合酶激酶-3β促進D-氨基半乳糖聯(lián)合脂多糖誘導的小鼠急性肝衰竭肝損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:以D-氨基半乳糖(D-GalN)和脂多糖(LPS)建立小鼠急性肝衰竭模型,研究caspase-1(半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白水解酶-1)在急性肝衰竭(ALF)動物模型中的作用及其可能機制。方法:以C57BL/6雄性小鼠為研究對象,將實驗分為兩部分:第一部分小鼠按隨機數(shù)字表分為正常對照組、ALF模型組(ALF2h組、ALF4h組、ALF6h組),每組10只;第二部分小鼠按隨機數(shù)字表分為正常對照組、Z-WEHD-FMK(氟甲基酮,caspase-1特異性抑制劑)單獨處理組、ALF模型組、Z-WEHD-FMK干預組(Z-WEHD-FMK溶于二甲基亞砜),每組10只。第一部分實驗將溶于生理鹽水的D-GalN聯(lián)合LPS(二者終濃度分別為450mg/kg和10μg/kg)以腹腔注射的方式注入小鼠體內(nèi),構建小鼠ALF動物模型,分別在D-GalN/LPS注射后2h、4h、6h麻醉(4%水合氯醛)小鼠取外周血,然后獲取肝組織迅速提取蛋白;第二部分實驗將Z-WEHD-FMK(3mg/kg)于造模前2h通過尾靜脈注射入小鼠體內(nèi),D-GalN/LPS注射6h后即刻麻醉小鼠取外周血(下腔靜脈血),然后獲取肝臟組織(肝右葉)迅速提取蛋白和總RNA。血清轉(zhuǎn)氨酶活性測定、組織病理學分析觀察肝臟組織損傷情況;Western blot檢測肝臟組織中caspase-1以及GSK-3β(糖原合酶激酶-3β)磷酸化的表達;實時定量PCR檢測細胞炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-33 mRNA的表達。結果:Caspase-1 mRNA和蛋白水平在ALF發(fā)生發(fā)展中表達升高。給予Z-WEHD-FMK抑制caspase-1活性后,可改善肝臟結構功能進而減輕肝損傷:Z-WEHD-FMK干預組與ALF模型組相比,前者肉眼觀肝臟出血、淤血較輕,光學顯微鏡下可見肝小葉結構基本完整,僅個別肝細胞可見氣球樣變,小葉內(nèi)及匯管區(qū)中性粒細胞、淋巴細胞等浸潤不明顯,血清ALT、AST水平較低[ALT:Z-WEHD-FMK干預組(479.2±39.5)U/L,ALF組(998.5±60.4)U/L,P0.05;AST:Z-WEHD-FMK干預組(478.5±28.6)U/L,ALF組(1180.7±91.4)U/L,P0.05];qRT-PCR結果顯示Z-WEHD-FMK干預組細胞炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-33的mRNA水平表達下調(diào);Western blot結果顯示Z-WEHD-FMK抑制caspase-1活性后,GSK-3β發(fā)生磷酸化而活性受抑制。結論:急性肝衰竭疾病進展過程中caspase-1的活化提高了GSK-3β活性,可能會促使炎癥反應應答的發(fā)生發(fā)展并最終造成肝損傷。因此,以caspase-1為靶點進行干預,有望為臨床上急性肝衰竭的治療和預防提供新思路。
【關鍵詞】：半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白水解酶-1 糖原合酶激酶-3β 肝功能衰竭 急性 炎癥
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575.3;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 1 材料與方法12-21
• 1.1 實驗對象12
• 1.2 主要藥品與試劑12
• 1.3 主要實驗儀器12-13
• 1.4 主要溶液的配制13-15
• 1.5 實驗方法15-21
• 2 實驗結果21-23
• 3 文章附圖23-28
• 4 討論28-30
• 5 結論30-31
• 6 參考文獻31-34
• 綜述34-41
• 參考文獻41-47
• 在學期間發(fā)表的學術論文與研究成果47-48
• 常用縮寫詞中英文對照表48-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51

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