本文關(guān)鍵詞：弓形蟲超氧化物歧化酶（SOD）基因分析和克隆表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：剛地弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,可以感染所有溫血?jiǎng)游?包括人、家畜和海洋哺乳動(dòng)物,引起人獸共患弓形蟲病。在多數(shù)情況下,人感染弓形蟲后沒有明顯的臨床癥狀,但是當(dāng)機(jī)體免疫低下時(shí),弓形蟲的感染可能會(huì)造成嚴(yán)重的后果。弓形蟲嚴(yán)重威脅著人類健康和畜牧業(yè)的發(fā)展,已引起醫(yī)學(xué)界和獸醫(yī)界的高度重視。所以,對(duì)弓形蟲與弓形蟲病的研究具有十分重要的意義。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)廣泛存在于多種生物體內(nèi),包括植物、動(dòng)物、微生物等,在醫(yī)學(xué)、食品業(yè)、工業(yè)上有潛在的利用價(jià)值。超氧化物歧化酶亦普遍存在于弓形蟲中,以往的研究表明,超氧化物歧化酶可能在弓形蟲的胞內(nèi)生長(zhǎng)中發(fā)揮重要作用。方法：分別對(duì)十個(gè)弓形蟲蟲株SOD基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,構(gòu)建相應(yīng)的重組克隆載體pEASY-SOD,經(jīng)DNA測(cè)序,獲得不同蟲株來源的SOD基因序列；然后用限制性內(nèi)切酶長(zhǎng)度多態(tài)性分析分型法(PCR-RFLP)和生物信息學(xué)的方法對(duì)弓形蟲SOD基因序列進(jìn)行分析。同時(shí),利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建重組真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-SOD,經(jīng)PCR、酶切與測(cè)序鑒定正確后,體外轉(zhuǎn)染HEK 293T細(xì)胞,利用熒光顯微鏡、SDS-PAGE和Western Blotting檢測(cè)蛋白表達(dá)。結(jié)果：十個(gè)不同蟲株來源的弓形蟲SOD基因序列大約1700bp, PCR-RFLP酶切的結(jié)果顯示酶切片段是相同的；DNA測(cè)序結(jié)果顯示十個(gè)SOD序列之間有43個(gè)堿基和24個(gè)氨基酸改變,變異度在0到1%之間；系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果顯示10株弓形蟲SOD序列可以大致分為兩組,且各組間存在著很小的差異。上述結(jié)果表明弓形蟲SOD具有高度保守性,可能是弓形蟲DNA疫苗的靶點(diǎn)。另外,重組真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-SOD構(gòu)建正確,經(jīng)熒光顯微鏡、SDS-PAGE和Western blotting鑒定,弓形蟲SOD基因可以在HEK293T細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá),并且具有一定的免疫活性。結(jié)論：弓形蟲SOD基因序列具有高度保守性,可能是弓形蟲DNA疫苗的靶點(diǎn)；成功構(gòu)建了重組真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-SOD,可在體外表達(dá)并有免疫活性,為后續(xù)進(jìn)行弓形蟲DNA疫苗實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：剛地弓形蟲 超氧化物歧化酶 PCR-RFLP 序列分析 真核表達(dá)載體 瞬時(shí)表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R382.5
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 主要符號(hào)說明11-12
• 前言12-14
• 第一部分 弓形蟲超氧化物歧化酶(SOD)基因分析14-39
• 材料14-15
• 實(shí)驗(yàn)方法15-22
• 結(jié)果22-37
• 討論37-39
• 第二部分 弓形蟲SOD基因體外克隆表達(dá)與鑒定39-53
• 材料39
• 實(shí)驗(yàn)方法39-46
• 結(jié)果46-51
• 討論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 附圖157
• 附圖257-58
• 致謝58-59
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文59-60
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 賈玉璽;聶大平;陳凌娟;李偉;申麗潔;;弓形蟲基因分型研究進(jìn)展[J];中國(guó)血吸蟲病防治雜志;2013年02期

  本文關(guān)鍵詞：弓形蟲超氧化物歧化酶（SOD）基因分析和克隆表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：268612