本文關(guān)鍵詞：量子點(diǎn)標(biāo)記與有機(jī)熒光試劑標(biāo)記對(duì)病毒活性影響的比較，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在生命科學(xué)領(lǐng)域,熒光成像技術(shù)是一種重要的手段。種類繁多的熒光染料中,硫氰酸熒光素(Fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)應(yīng)用最為廣泛,但其易于光漂白,無(wú)法對(duì)標(biāo)記物進(jìn)行長(zhǎng)期的追蹤和觀察標(biāo)記物的動(dòng)力學(xué)過(guò)程,在免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)應(yīng)用中又易造成非特異染色,存在敏感性偏低,熒光效率較低等缺點(diǎn),現(xiàn)已逐漸被新型熒光納米材料所取代。作為一種理想的熒光納米探針,量子點(diǎn)(Quantum Dots, QDs)因具有寬的激發(fā)光譜且連續(xù)分布,發(fā)射光譜窄而對(duì)稱,顏色可調(diào),光化學(xué)穩(wěn)定性高,熒光壽命長(zhǎng)等優(yōu)越的熒光特性,在分析化學(xué)及生命科學(xué)領(lǐng)域引起廣泛的關(guān)注。量子點(diǎn)(QDs)因其特殊的光學(xué)性質(zhì)越來(lái)越多的被用于標(biāo)記及示蹤病毒,但是,相比有機(jī)熒光試劑,QDs體積更大,且含有有毒金屬元素,很多人都認(rèn)為,QDs標(biāo)記可能會(huì)影響被標(biāo)記物的生物活性,但量子點(diǎn)標(biāo)記病毒對(duì)病毒毒性的影響方面的研究也鮮有報(bào)道。禽流感病毒一般都具有嚴(yán)格的宿主特異性,能在天然宿主細(xì)胞上很好進(jìn)行地復(fù)制和傳播,因此,我們選擇低致病性禽流感病毒H9N2作為研究對(duì)象,以人肺上皮癌細(xì)胞A549細(xì)胞作為宿主細(xì)胞模型,分別以QDs和常用有機(jī)熒光試劑—熒光素異硫氰酸酯(FITC)標(biāo)記H9N2病毒,以未標(biāo)記病毒、QDs標(biāo)記病毒、FITC標(biāo)記病毒侵染宿主細(xì)胞,通過(guò)病毒侵染后細(xì)胞活性和細(xì)胞因子分泌水平的變化,比較了QDs標(biāo)記和FITC標(biāo)記對(duì)病毒活性的影響。進(jìn)一步考察量子點(diǎn)能否安全應(yīng)用于熒光標(biāo)記及成像,為研究病毒的致病機(jī)制及預(yù)防病毒性疾病奠定重要的理論基礎(chǔ),為評(píng)價(jià)量子點(diǎn)的生物效應(yīng)、量子點(diǎn)標(biāo)記對(duì)病毒本身行為的影響、研制適用于活體示蹤的量子點(diǎn)提供重要依據(jù),為此,本文的研究工作具有實(shí)際意義。本論文主要包括以下方面的內(nèi)容：(1)以鏈霉親和素聯(lián)接的量子點(diǎn)與親和素聯(lián)接的異硫氰酸熒光素通過(guò)生物素-親和素的經(jīng)典生物反應(yīng)標(biāo)記H9N2病毒,以A549人肺上皮癌細(xì)胞為宿主細(xì)胞模型,探究了不同濃度和不同時(shí)間條件下的宿主細(xì)胞活性變化,比較QDs標(biāo)記和FITC標(biāo)記病毒對(duì)病毒活性的影響。(2)以同樣的標(biāo)記物和標(biāo)記策略標(biāo)記H9N2病毒,比較標(biāo)記后病毒對(duì)宿主細(xì)胞人肺上皮癌細(xì)胞A549分泌IL-6、IFN-γ、IL-12水平的影響。(3)以同樣標(biāo)記策略標(biāo)記H9N2病毒,選擇QDs605和QDs525兩種不同粒徑量子點(diǎn)標(biāo)記H9N2病毒探究對(duì)細(xì)胞活性的影響。我們的結(jié)果證實(shí),與FITC標(biāo)記相比,在短時(shí)間孵育的情況下,QDs標(biāo)記對(duì)病毒的活性影響更小,說(shuō)明QDs不僅比有機(jī)熒光試劑有更強(qiáng)的熒光性能,而且對(duì)被標(biāo)記物活性的影響也更小,是一種優(yōu)良的熒光標(biāo)記試劑�；赒Ds更優(yōu)異的熒光性能,可以認(rèn)為,QDs更適合用于病毒的示蹤研究。
【關(guān)鍵詞】：異硫氰酸熒光素 量子點(diǎn) 病毒 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：O657.3;R373
【目錄】：

• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 第1章 緒論12-28
• 1.1 引言12-13
• 1.2 量子點(diǎn)13-15
• 1.2.1 量子點(diǎn)的概念13
• 1.2.2 量子點(diǎn)的的結(jié)構(gòu)及光學(xué)性能13-15
• 1.3 量子點(diǎn)的制備15-16
• 1.4 量子點(diǎn)的毒性16-17
• 1.5 量子點(diǎn)在生物及醫(yī)學(xué)分析中的應(yīng)用17-20
• 1.5.1 應(yīng)用于生物分子的檢測(cè)17
• 1.5.2 應(yīng)用于生物芯片技術(shù)17-18
• 1.5.3 應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)18-19
• 1.5.4 應(yīng)用于活體標(biāo)記和組織成像19
• 1.5.5 應(yīng)用于分析化學(xué)檢測(cè)19-20
• 1.6 異硫氰酸熒光素20-21
• 1.6.1 異硫氰酸熒光素簡(jiǎn)介20
• 1.6.2 異硫氰酸熒光素的結(jié)構(gòu)及光學(xué)性能20-21
• 1.7 異硫氰酸熒光素的應(yīng)用21-22
• 1.7.1 異硫氰酸熒光素應(yīng)用于生物標(biāo)記21
• 1.7.2 異硫氰酸熒光素應(yīng)用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)21-22
• 1.7.3 異硫氰酸熒光素的其他應(yīng)用22
• 1.8 量子點(diǎn)標(biāo)記病毒研究進(jìn)展22-24
• 1.9 細(xì)胞因子24-26
• 1.9.1 細(xì)胞因子的概念24
• 1.9.2 細(xì)胞因子的結(jié)構(gòu)24-25
• 1.9.3 細(xì)胞因子的功能25
• 1.9.4 細(xì)胞因子的分類25-26
• 1.10 本論文出發(fā)點(diǎn),研究?jī)?nèi)容及意義26-28
• 1.10.1 出發(fā)點(diǎn)26
• 1.10.2 研究?jī)?nèi)容26-27
• 1.10.3 研究意義27-28
• 第2章 FITC和QDs標(biāo)記病毒對(duì)A549細(xì)胞活性影響的比較28-40
• 2.1 引言28-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分29-32
• 2.2.1 試劑與儀器29
• 2.2.2 異硫氰酸熒光素的修飾29-30
• 2.2.3 緩沖溶液的配制30
• 2.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)液的配置30
• 2.2.5 H9N2的擴(kuò)增30-31
• 2.2.6 H9N2的純化31
• 2.2.7 病毒蛋白濃度測(cè)定31
• 2.2.8 A549細(xì)胞的培養(yǎng)31
• 2.2.9 H9N2的標(biāo)記及細(xì)胞活性的測(cè)定31-32
• 2.3 結(jié)果討論32-38
• 2.3.1 親和素修飾異硫氰酸熒光素(FITC-Avidin)的紫外吸收光譜和熒光光譜32
• 2.3.2 病毒蛋白濃度32
• 2.3.3 純FITC對(duì)A549細(xì)胞活性的影響32-33
• 2.3.4 FITC-Avidin對(duì)A549細(xì)胞活性的影響33
• 2.3.5 FITC-Avidin和QDs對(duì)細(xì)胞活性影響的比較33-34
• 2.3.6 不同濃度FITC-Avidin標(biāo)記病毒對(duì)細(xì)胞活性的影響34-36
• 2.3.7 不同侵染時(shí)間下FITC標(biāo)記H9N2對(duì)A549細(xì)胞活性的影響36-37
• 2.3.8 不同侵染時(shí)間下FITC標(biāo)記和QDs標(biāo)記H9N2對(duì)A549細(xì)胞活性影響的比較37-38
• 2.4 結(jié)論38-40
• 第3章 FITC和QDs標(biāo)記H9N2對(duì)A549細(xì)胞因子分泌水平影響的比較40-48
• 3.1 引言40-42
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分42-45
• 3.2.1 試劑與儀器42
• 3.2.2 異硫氰酸熒光素的修飾42
• 3.2.3 緩沖溶液的配制42-43
• 3.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)液的配置43
• 3.2.5 H9N2的擴(kuò)增43
• 3.2.6 H9N2的純化43
• 3.2.7 病毒蛋白濃度測(cè)定43-44
• 3.2.8 A549細(xì)胞的培養(yǎng)44
• 3.2.9 H9N2的標(biāo)記及細(xì)胞活性的測(cè)定44
• 3.2.10 細(xì)胞因子分泌水平的測(cè)定44-45
• 3.3 結(jié)果討論45-47
• 3.3.1 不同侵染時(shí)間FITC-Avidin對(duì)標(biāo)記病毒誘導(dǎo)細(xì)胞因子分泌的影響45-46
• 3.3.2 FITC-Avidin和QDs標(biāo)記病毒不同侵染時(shí)間誘導(dǎo)細(xì)胞因子分泌影響的比較46-47
• 3.4 結(jié)論47-48
• 第4章 不同粒徑量子點(diǎn)標(biāo)記病毒對(duì)細(xì)胞活性的影響48-54
• 4.1 引言48
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分48-50
• 4.2.1 試劑與儀器48-49
• 4.2.2 緩沖溶液的配制49
• 4.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)液的配置49
• 4.2.4 H9N2的擴(kuò)增49-50
• 4.2.5 H9N2的純化50
• 4.2.6 病毒蛋白濃度測(cè)定50
• 4.2.7 A549細(xì)胞的培養(yǎng)50
• 4.2.8 H9N2的標(biāo)記及細(xì)胞活性的測(cè)定50
• 4.3 結(jié)果討論50-52
• 4.3.1 不同粒徑量子點(diǎn)的表征51
• 4.3.2 不同粒徑不同濃度量子點(diǎn)對(duì)細(xì)胞活性的影響51-52
• 4.3.3 不同粒徑不同濃度量子點(diǎn)標(biāo)記H9N2對(duì)細(xì)胞活性的影響52
• 4.4 結(jié)論52-54
• 參考文獻(xiàn)54-62
• 致謝62-64
• 碩士期間發(fā)表論文64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳基耘;吲哚類菁染料核殼熒光納米顆粒的制備及其應(yīng)用[D];湖南大學(xué);2006年

  本文關(guān)鍵詞：量子點(diǎn)標(biāo)記與有機(jī)熒光試劑標(biāo)記對(duì)病毒活性影響的比較，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：267488