本文關(guān)鍵詞：維生素D受體在SD大鼠原代脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)規(guī)律及脂質(zhì)沉積研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：維生素D受體(Vitamin D Receptor,VDR)屬于核受體(類固醇激素/甲狀腺激素受體)超家族成員,以核受體(Nuclear VDR,nVDR)和膜受體(Membranae VDR,mVDR)兩種形式存在,nVDR分子量大約50kDa左右,mVDR分子量大約60kDa左右,在體內(nèi)主要介導(dǎo)維生素D的細(xì)胞作用,被激活的VDR在細(xì)胞核內(nèi)與視黃酸X受體(retinoid X receptor,RXR)形成異源二聚體,結(jié)合于靶基因啟動(dòng)子區(qū)的維生素D反應(yīng)元件上,通過(guò)直接或間接方式激活下游靶基因的表達(dá),以介導(dǎo)調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣磷平衡、骨鹽沉積、細(xì)胞的增殖分化及免疫系統(tǒng)功能等生理過(guò)程。然而對(duì)于VDR是否在脂肪細(xì)胞中表達(dá)至今在學(xué)術(shù)界尚存在較大爭(zhēng)議。一方面1,25(OH)2D對(duì)脂肪細(xì)胞分化的作用存在分歧;另一方面,1,25(OH)2D還會(huì)影響脂肪因子的分泌,增加了1,25(OH)2D與脂肪組織互作的復(fù)雜性。有研究表明,超表達(dá)VDR會(huì)抑制3T3L1前體脂肪細(xì)胞的分化;但在全身性敲除VDR的小鼠體內(nèi)卻表現(xiàn)出體脂減少的現(xiàn)象。因此,有關(guān)VDR對(duì)脂肪細(xì)胞分化的作用及其方式,仍存有爭(zhēng)論,需要進(jìn)一步驗(yàn)證。本研究以體外培養(yǎng)的SD大鼠原代脂肪細(xì)胞為研究材料,采用熒光免疫組化法檢測(cè)VDR及脂質(zhì)沉積在脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的變化規(guī)律,利用qPCR和Western Blot方法研究原代脂肪細(xì)胞中VDR的作用。為1,25(OH)2D預(yù)防和治療肥胖提供理論依據(jù),對(duì)機(jī)體的代謝健康有重要意義。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)VDR在SD大鼠脂肪組織及前體脂肪細(xì)胞的細(xì)胞核中表達(dá);(2)在SD大鼠前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中VDR表達(dá)規(guī)律為先降低后升高,在細(xì)胞單層匯合并分化至第8天時(shí),VDR基因表達(dá)量最低,蛋白表達(dá)量最低,后又有所升高;(3)細(xì)胞中脂滴隨分化時(shí)間的推移逐漸增加,成脂基因PPAR?在分化16天時(shí)與VDR表達(dá)量差異極顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。(4)VDR有可能參與前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程,并且當(dāng)細(xì)胞中脂滴達(dá)到閾值后會(huì)反饋調(diào)節(jié)PPAR?基因的表達(dá),其作為一個(gè)潛在的調(diào)節(jié)因子來(lái)抑制細(xì)胞繼續(xù)成脂,但卻并不是通過(guò)影響PPAR?基因mRNA降解而實(shí)現(xiàn)的,其可能直接或間接作用于PPAR?基因的啟動(dòng)子區(qū)而發(fā)揮一定的轉(zhuǎn)綠調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：維生素D受體 脂肪細(xì)胞 PPAR? 免疫熒光染色 Bodipy
【學(xué)位授予單位】：陜西理工學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 緒論12-24
• 1.1 維生素受體12-17
• 1.1.1 維生素D受體概述12-13
• 1.1.2 維生素D受體的功能結(jié)構(gòu)域13-16
• 1.1.3 維生素D受體反應(yīng)元件16-17
• 1.2 PPAR概述17-21
• 1.2.1 PPARγ 與脂肪細(xì)胞的關(guān)系19-20
• 1.2.2 PPARγ 與疾病信號(hào)傳導(dǎo)20-21
• 1.3 維生素D受體與脂肪細(xì)胞相關(guān)研究進(jìn)展21-24
• 第二章 維生素D受體在脂肪組織中的表達(dá)定位研究24-32
• 2.0 引言24-25
• 2.1 試驗(yàn)材料25-26
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物25
• 2.1.2 抗體及所需試劑25
• 2.1.3 儀器設(shè)備25-26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法26-27
• 2.2.1 脂肪組織石蠟切片制作方法26
• 2.2.2 脂肪組織HE染色方法26
• 2.2.3 脂肪組織免疫熒光染色方法26-27
• 2.2.4 肪組織 RNA 提取與反轉(zhuǎn)錄方法27
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-29
• 2.3.1 大鼠皮下脂肪組織HE染色結(jié)果27-28
• 2.3.2 大鼠皮下脂肪組織免疫熒光染色結(jié)果28
• 2.3.3 大鼠不同部位脂肪組織PCR半定量分析結(jié)果28-29
• 2.4 小結(jié)29-32
• 第三章 SD大鼠原代脂肪細(xì)胞分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化32-36
• 3.1 試驗(yàn)材料32
• 3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物32
• 3.1.2 培養(yǎng)基及所需試劑32
• 3.1.3 儀器設(shè)備32
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法32-33
• 3.2.1 脂肪細(xì)胞的分離32-33
• 3.2.2 脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)33
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-35
• 3.3.1 脂肪細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果33-35
• 3.4 討論35-36
• 第四章 維生素D受體與PPARg基因表達(dá)研究36-46
• 4.0 引言36
• 4.1 試驗(yàn)材料36-37
• 4.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物36-37
• 4.1.2 培養(yǎng)基及所需試劑37
• 4.1.3 儀器設(shè)備37
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法37-39
• 4.2.1 Bodipy染色37
• 4.2.2 細(xì)胞免疫熒光染色37-38
• 4.2.3 qPCR檢測(cè)基因表達(dá)量38
• 4.2.4 Western Blot檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)量38-39
• 4.3 結(jié)果39-43
• 4.3.1 細(xì)胞分化各階段脂滴熒光染色結(jié)果39-40
• 4.3.2 細(xì)胞分化各階段VDR免疫熒光染色結(jié)果40-42
• 4.3.3 細(xì)胞分化各階段VDR蛋白表達(dá)結(jié)果42
• 4.3.4 細(xì)胞分化各階段VDR基因表達(dá)結(jié)果42-43
• 4.4 討論43-46
• 第五章 維生素D受體超表達(dá)載體構(gòu)建及功能分析46-56
• 5.1 引言46-47
• 5.2 試驗(yàn)材料47-48
• 5.2.1 細(xì)菌及細(xì)胞47
• 5.2.2 酶和所需試劑47
• 5.2.3 儀器設(shè)備47-48
• 5.3 試驗(yàn)方法48-51
• 5.3.1 引物設(shè)計(jì)與合成48
• 5.3.2 目的基因的PCR擴(kuò)增48
• 5.3.3 目的片段和載體的雙酶切、回收、和純化48-49
• 5.3.4 目的基因與載體的連接與轉(zhuǎn)化DH5α49
• 5.3.5 菌液PCR檢測(cè)陽(yáng)性菌落49
• 5.3.6 293T細(xì)胞及Hela細(xì)胞培養(yǎng)49-50
• 5.3.7 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 293T細(xì)胞和Hela細(xì)胞50
• 5.3.8 Western Blot及qPCR分析50-51
• 5.4 結(jié)果51-54
• 5.4.1 目的基因PCR擴(kuò)增，雙酶切及陽(yáng)性克隆鑒定結(jié)果51-52
• 5.4.2 293T細(xì)胞及Hela細(xì)胞形態(tài)觀察及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染結(jié)果52
• 5.4.3 Western Blot結(jié)果52-53
• 5.4.4 qPCR結(jié)果53-54
• 5.5 討論54-56
• 結(jié)論56-58
• 小結(jié)56
• 創(chuàng)新點(diǎn)56
• 研究展望56-58
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 中英文縮略詞表62-64
• 附圖64-66
• 攻讀碩士學(xué)位期間學(xué)術(shù)成果66-68
• 致謝68

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本文編號(hào)：265212