本文關(guān)鍵詞：能量代謝，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】： 理中丸是張仲景治療脾陽(yáng)虛證的傳統(tǒng)名方,由干姜、人參、白術(shù)、炙甘草四味藥組成,功能溫中散寒,補(bǔ)氣健脾。干姜作為理中丸的君藥,在全方的配伍結(jié)構(gòu)中處于核心地位,在對(duì)脾胃虛寒證的治療中發(fā)揮著關(guān)鍵性作用。為了從實(shí)驗(yàn)的角度對(duì)君藥在方劑中核心配伍地位的內(nèi)涵進(jìn)行揭示,本實(shí)驗(yàn)以理中丸中的君藥干姜作為研究切入點(diǎn),借助中醫(yī)脾陽(yáng)虛證候模型,對(duì)干姜及其不同有效部位對(duì)理中丸調(diào)節(jié)消化吸收及能量代謝功能的影響進(jìn)行了比較研究,從藥味和化學(xué)成分群兩個(gè)層次的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的角度,對(duì)君藥干姜決定理中丸主要功效的核心地位進(jìn)行了揭示。 全文共分為脾陽(yáng)虛模型的制備和干姜及其成分對(duì)理中丸藥效學(xué)影響的比較兩大部分。 1“石膏-知母”復(fù)合法脾陽(yáng)虛模型的制備 1.1目的 以清熱瀉火藥石膏-知母代替常用的大黃、番瀉葉類(lèi)苦寒瀉下藥,并結(jié)合饑飽失常、勞倦過(guò)度的方法進(jìn)行造模,以期建立更符合中醫(yī)“寒涼傷陽(yáng)、饑飽傷氣和勞倦傷脾”致病思路的中醫(yī)脾陽(yáng)虛證候模型。 1.2方法 模型動(dòng)物隔日足量喂食,每日在25℃水中游泳,直至大鼠連續(xù)三次吐泡下沉,或沉入水底,3秒內(nèi)不能自行浮出水面,并以三種不同給藥頻率灌胃給予石膏一知母煎液,比較石膏-知母不同給藥方法對(duì)制備脾陽(yáng)虛模型的影響。方法1:造模1-6日隔日灌胃4℃的石膏-知母煎液(濃度為4:1,下同),劑量為10ml/kg(下同);造模7-12日,每同灌胃石膏-知母煎液,自然恢復(fù)15天。方法2:隔日灌胃給予4℃的石膏-知母煎液,劑量為10ml/kg,連續(xù)20天,自然恢復(fù)12天。方法3:每R灌胃給予4℃的石膏一知母煎液,2ml/只,連續(xù)12天,自然恢復(fù)9天。觀察造模動(dòng)物的一般生物學(xué)特征改變,檢測(cè)體溫、體重、食量的變化,以及血中D-木糖、6AS、MLT含量和腸組織中N0水平等與消化吸收功能及能量代謝相關(guān)指標(biāo)。 1.3結(jié)果 三種造模方法均能引起造模動(dòng)物一般生物學(xué)特征的改變,出現(xiàn)腹瀉、倦怠、體溫下降、體重減輕等表現(xiàn)。其中方法2的影響最小,模型動(dòng)物恢復(fù)較快;方法1和方法3都能造成模型動(dòng)物一般生物學(xué)特征的明顯改變,且以方法3引起的模型癥狀變化更加明顯且穩(wěn)定。在消化吸收及能量代謝的相關(guān)指標(biāo)方面,造模方法3能使血中GAS、MLT、D-木糖含量降至正常水平以下,使腸運(yùn)動(dòng)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)NO的水平降低,體溫減低明顯、食量減低、體重增長(zhǎng)減慢。造模方法1對(duì)消化吸收相關(guān)藥理指標(biāo)的改變與造模方法3的影響相似,但對(duì)模型動(dòng)物的體重和食量的影響不明顯;造模方法2除能使模型動(dòng)物的體重減輕外,對(duì)其他各指標(biāo)均無(wú)顯著影響。 1.4結(jié)論 對(duì)比實(shí)驗(yàn)采用的三種石膏-知母的給藥方法,方法3的造模效果最為顯著和穩(wěn)定,即以每日灌胃給藥,連續(xù)12天,恢復(fù)9天,是本實(shí)驗(yàn)證實(shí)的最有效的脾陽(yáng)虛證候模型制備方法。 2干姜及其不同有效部位對(duì)理中丸消化吸收功能及代謝的影響 2.1目的 通過(guò)對(duì)理中丸中君藥干姜,以及干姜中揮發(fā)性成分和水溶性成分對(duì)理中丸主要功效影響的研究,從藥味和化學(xué)成分群兩個(gè)層次,證實(shí)君藥干姜及干姜中的主要活性成分群對(duì)理中丸整體功效的決定性影響,以初步揭示理中丸中君藥核心地位的藥理學(xué)和化學(xué)內(nèi)涵。 2.2方法 采用石膏-知母復(fù)合造模法制備大鼠脾陽(yáng)虛證候模型,造模期為14天1;治療期間各給藥組分別給予治療藥物,連續(xù)給藥8天。供試藥物分別為理中丸、四君子湯供試液,干姜水溶性成分和不同劑量揮發(fā)性成分(大、中、小劑量比為2:1:0.5)分別代替干姜原藥材配伍入理中丸,組成的干姜水溶性成分理中配方和大、中、小劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方供試液,其中揮發(fā)性成分的中劑量相當(dāng)于干姜的常規(guī)劑量。造模及治療過(guò)程中,對(duì)各組大鼠的體溫、體重、食量進(jìn)行測(cè)定;治療結(jié)束時(shí),測(cè)定下列兩組指標(biāo)。與消化吸收有關(guān)的指標(biāo)有:胃的排空率和腸推進(jìn)率;血中D-木糖(D-xylose)、胃泌素(GAS)、胃動(dòng)素(MLT)含量,膽堿酯酶(CHE)活性,胃組織中H~+-K~+-ATP酶活性,空腸組織中NO含量;腸中血管活性腸肽(VIP)和腸間質(zhì)細(xì)胞(ICC)含量(免疫組化法);測(cè)定腸肌間神經(jīng)叢中膽堿能神經(jīng)(AchE陽(yáng)性神經(jīng))和氮能神經(jīng)(NOS陽(yáng)性神經(jīng))的分布(組織化學(xué)法)及累計(jì)光密度;觀察胃、腸的病理改變,以及干姜揮發(fā)性成分理中配方中、大劑量組大鼠肝的病理改變。與能量代謝相關(guān)的指標(biāo)有:空腹血糖值,血中肌酸激酶(CK)活性、乳酸(LD)水平;胃、空腸、骨骼肌線(xiàn)粒體ATP酶活性;肌糖元的含量;下丘腦中5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)含量。 2.3結(jié)果 為了對(duì)不同層次的研究問(wèn)題分別進(jìn)行說(shuō)明,研究結(jié)果分為三個(gè)層次進(jìn)行表述。 2.3.1理中丸與四君子湯對(duì)脾陽(yáng)虛證消化吸收功能和能量代謝的影響差異 在胃的運(yùn)動(dòng)和消化功能方面,四君子湯可提高血中MLT、GAS水平,增加胃的排空率,但作用明顯弱于理中丸。四君子湯對(duì)正常的胃H~+-K~+-ATP酶活性有明顯抑制作用,但理中丸作用不明顯。在腸的消化吸收功能方面,四君子湯和理中丸均可降低腸推進(jìn)率,且無(wú)明顯差異。四君子湯主要是通過(guò)降低血中CHE活性水平引起的,對(duì)NO無(wú)明顯影響。雖然四君子湯對(duì)提高模型大鼠D-木糖吸收率和增加食量方面的作用優(yōu)于理中丸,但兩方在增加模型動(dòng)物體重方面的作用無(wú)顯著差異。并且對(duì)胃腸病理形態(tài)的觀察顯示,四君子湯對(duì)胃、腸粘膜的保護(hù)作用較理中丸弱。 在對(duì)能量代謝的影響方面,理中丸能改善造模引起的CK活性降低、LD和肌糖元含量升高;降低下丘腦中5-HIAA含量,升高體溫。理中丸對(duì)造模引起的代償性血糖升高、骨骼肌線(xiàn)粒體中Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性增強(qiáng)均有明顯的抑制作用。理中丸除了對(duì)胃組織線(xiàn)粒體中的Na~+-K~+-ATP酶的活性有所降低外,對(duì)胃腸線(xiàn)粒體中的其他ATP酶活性均無(wú)明顯影響。 而四君子湯不能糾正造模引起的大鼠體溫降低,對(duì)下丘腦中5-HIAA的含量沒(méi)有明顯影響;除了對(duì)血中CK的活性降低和對(duì)胃線(xiàn)粒體中ATP酶的抑制作用強(qiáng)于理中丸外,對(duì)其他指標(biāo)的影響均弱于理中丸。 2.3.2干姜揮發(fā)性成分和水溶性成分對(duì)理中丸調(diào)節(jié)脾陽(yáng)虛模型消化吸收功能和能量代謝作用的影響 在對(duì)消化吸收功能的影響方面,干姜揮發(fā)性成分理中配方和干姜水溶性成分理中配方均能提高脾陽(yáng)虛模型血中GAS和MLT水平,干姜揮發(fā)性成分理中配方的作用優(yōu)于干姜水溶性成分理中配方,也優(yōu)于理中丸原方;但兩者在增加胃排空率方面的作用無(wú)明顯差異。干姜水溶性成分理中配方對(duì)血中CHE的抑制作用較強(qiáng),同時(shí)能升高模型大鼠腸組織中降低的NO水平,降低模型大鼠腸中ICC數(shù)量,但對(duì)腸中VIP的含量無(wú)明顯影響。干姜揮發(fā)性成分理中配方對(duì)血中CHE活性的抑制作用弱于干姜水溶性成分理中配方,也不能提高空腸中抑制性神經(jīng)遞質(zhì)NO的釋放,且對(duì)腸組織VIP的含量也無(wú)明顯影響,僅在抑制腸中ICC的數(shù)量方面作用顯著。然而比較干姜揮發(fā)性成分理中配方、干姜水溶性成分理中配方和理中丸原方對(duì)大鼠小腸推進(jìn)率的抑制作用,三者并未顯示出明顯差異。此外,干姜揮發(fā)性成分理中配方對(duì)模型大鼠D-木糖的吸收率的增加和促進(jìn)體重增長(zhǎng)方面的作用,優(yōu)于干姜水溶性成分理中配方和理中丸。在對(duì)胃腸組織形態(tài)的保護(hù)方面,干姜揮發(fā)性成分理中配方的作用更優(yōu)。 在對(duì)能量代謝的影響方面,干姜揮發(fā)性成分理中配方能有效降低下丘腦5-HIAA水平,體溫明顯升高;同時(shí)能有效降低血中CK的活性和LD的含量,并能抑制造模引起的骨骼肌ATP酶活性及血糖的代償性增高,使之恢復(fù)正常水平。干姜水溶性成分理中配方對(duì)下丘腦中5-HIAA不但沒(méi)有降低作用,反而使其含量升高,對(duì)造模引起的體溫降低無(wú)明顯影響。除了對(duì)骨骼肌中ATP酶的抑制作用較為強(qiáng)烈外,干姜水溶性成分理中配方對(duì)其他各指標(biāo)的改善作用均弱于干姜揮發(fā)性成分理中配方。 2.3.3不同劑量干姜揮發(fā)性成分對(duì)理中丸調(diào)節(jié)脾陽(yáng)虛模型消化吸收功能和能量代謝的影響 干姜揮發(fā)性成分中劑量配伍能顯著提高血中GAS和MLT水平,使之達(dá)到正常值以上,并能顯著提高胃排空率。干姜揮發(fā)性成分大、小劑量理中配方雖也具有相似的作用,但作用較干姜揮發(fā)性成分中劑量配方弱。各干姜揮發(fā)性成分理中配方主要通過(guò)影響膽堿能神經(jīng)功能和空腸ICC數(shù)量來(lái)抑制腸的運(yùn)動(dòng)功能。干姜揮發(fā)性成分中劑量配方對(duì)ICC數(shù)量的減少作用最強(qiáng),大劑量配方對(duì)抑制血中CHE活性的作用最突出。對(duì)腸中NO含量的影響中,除干姜揮發(fā)性成分小劑量能使其含量上升外,姜醚中、大劑量表現(xiàn)為降低的作用,但中劑量配方能使肌間神經(jīng)叢中氮能神經(jīng)的累積光密度值(IOD)增高。從對(duì)改善腸推進(jìn)率的作用來(lái)看,大、中、小劑量的干姜揮發(fā)性成分理中配方間沒(méi)有明顯差異。但對(duì)胃腸組織形態(tài)的保護(hù)方面,中劑量配方的作用更為顯著。 對(duì)能量代謝功能的影響方面,中劑量和大劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方可有效降低下丘腦5-HIAA水平,并使模型大鼠體溫上升至正常水平;小劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方雖然對(duì)下丘腦5-HIAA水平也有降低作用,但對(duì)造模后大鼠的體溫降低未顯示出明顯改善作用。三劑量理中配方均能有效降低血中CK活性和LD水平,以及肌糖元含量,其中中劑量和大劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方的作用更加明顯。對(duì)于造模引起的血糖及骨骼肌線(xiàn)粒體中Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性代償性增高,三劑量理中配方均有降低作用,中劑量配方對(duì)血糖的降低作用最突出,而小劑量配方對(duì)ATP酶的影響較明顯。 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),大劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方能導(dǎo)致血中GOT活性有所升高,使肝小葉中央靜脈周?chē)谓M織出現(xiàn)少量的細(xì)胞壞死,提示干姜揮發(fā)性成分配伍劑量過(guò)大時(shí),有可能引起肝臟的損害。而小劑量和中劑量干姜揮發(fā)性成分配伍對(duì)肝臟的功能未見(jiàn)損害作用。 2.4結(jié)論 在對(duì)脾陽(yáng)虛證模型的治療中,理中丸所代表的溫陽(yáng)健脾法是針對(duì)脾陽(yáng)虛證進(jìn)行治療的基本立法,干姜是理中丸實(shí)現(xiàn)溫陽(yáng)散寒作用的核心藥物;而在干姜所含的揮發(fā)性成分和水溶性成分中,干姜的揮發(fā)性成分成分對(duì)理中丸功效的影響最為突出,對(duì)理中丸調(diào)節(jié)脾陽(yáng)虛證模型消化吸收功能和能量代謝具有決定性作用。隨著干姜揮發(fā)性成分在理中配方中配伍劑量的增加,理中配方的功效的作用強(qiáng)度發(fā)生改變,以揮發(fā)性成分中、大劑量配伍時(shí),其療效顯著提高,但大劑量干姜揮發(fā)性成分理中配方時(shí),存在對(duì)模型動(dòng)物的肝臟產(chǎn)生損害傾向,因此從本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果判斷,干姜揮發(fā)性成分以中劑量配伍時(shí),其療效最佳。 通過(guò)上述的研究可以證明,君藥干姜在理中丸配伍結(jié)構(gòu)中的核心地位和功效上的決定性作用并不是方劑學(xué)理論中純粹理論層面上的假設(shè),而是具有重要的事實(shí)基礎(chǔ)的。對(duì)方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的揭示,又會(huì)對(duì)方劑配伍理論的認(rèn)識(shí)產(chǎn)生至關(guān)重要的影響。

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