為了更快速精準(zhǔn)檢測(cè)到極性強(qiáng)、干擾大、含量低、難分析的氨基酸,建立了基于CE-MS的新方法。利用連續(xù)多段進(jìn)樣方式優(yōu)化在線富集效果,并將兩技術(shù)聯(lián)用,用于煙草氨基酸的快速檢測(cè)。結(jié)果表明, 16種氨基酸在0.000 7～6μg/m L質(zhì)量濃度范圍具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)在0.993 2～1之間,檢測(cè)限范圍為1.31～11.54μg/kg,大部分氨基酸加標(biāo)量在0.15, 0.3和1.5μg/mL三個(gè)水平下回收率范圍為75%～125%,方法精密度小于10%。僅需4 min就可實(shí)現(xiàn)16種氨基酸的快速分析,同時(shí)樣品分析通量提高5倍,靈敏度提高17.5～33.1倍。該方法具有高靈敏、高通量、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn),適用于生物和食品樣品中氨基酸的快速精準(zhǔn)檢測(cè)。 

【文章來源】：食品工業(yè). 2020,41(10)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

多進(jìn)樣方式考察鹽濃度對(duì)質(zhì)譜響應(yīng)的影響

濃度試驗(yàn)點(diǎn)的優(yōu)化情況。如果樣品基質(zhì)中沒有鹽，無法與背景電解質(zhì)之間形成電場(chǎng)差異，因而無法富集，大體積進(jìn)樣后則導(dǎo)致峰展寬，分離度變差。隨著樣品基質(zhì)中鹽含量逐漸增加，從50mmol/L升高至200mmol/L，其與背景電解質(zhì)之間的電導(dǎo)差異越來越大，富集效果越來越顯著，因而峰型和分離度均得到顯著改善。當(dāng)醋酸銨濃度為200mmol/L時(shí)效果最佳。圖1多進(jìn)樣方式考察鹽濃度對(duì)質(zhì)譜響應(yīng)的影響2.1.2酸濃度的影響將甲酸體積分?jǐn)?shù)分別為4%，2%，1%和0.5%加入配制好的含有200mmol/L醋酸銨的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液中。進(jìn)樣方式同2.1.1中所述。圖2列出了一次連續(xù)進(jìn)樣同時(shí)優(yōu)化5個(gè)不同甲酸體積分?jǐn)?shù)的條件試驗(yàn)。結(jié)果表明，甲酸體積分?jǐn)?shù)對(duì)在線富集方法影響不顯著。為了保證氨基酸在溶液中的穩(wěn)定性以及富集效果，最終選擇含有2%甲酸為最優(yōu)結(jié)果。綜上樣品基質(zhì)即復(fù)溶液的優(yōu)化結(jié)果為400mmol/L醋酸銨和2%甲酸溶液。圖2多進(jìn)樣方式考察酸濃度對(duì)質(zhì)譜響應(yīng)的影響2.1.3進(jìn)樣時(shí)間的影響隨后考察連續(xù)進(jìn)樣時(shí)間對(duì)在線富集的影響。用優(yōu)化后的復(fù)溶液稀釋氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣壓力為100mbar，進(jìn)樣持續(xù)時(shí)間分別為5，10，20，40和60

《食品工業(yè)》2020年第41卷第10期316分析檢測(cè)s，其余進(jìn)樣方式同2.1.1中所述。從圖3可知，進(jìn)樣時(shí)間持續(xù)60s的質(zhì)譜峰面積和峰高最大，但是綜合考慮到多進(jìn)樣的分離和富集效果，最終選擇進(jìn)樣時(shí)間40s。圖3多進(jìn)樣方式考察進(jìn)樣時(shí)間對(duì)質(zhì)譜響應(yīng)的影響2.2多進(jìn)樣方式間隔帶的優(yōu)化圖4多進(jìn)樣方法的間隔時(shí)間為10s對(duì)分離的影響圖5多進(jìn)樣方法的間隔時(shí)間為40s對(duì)分離的影響圖6多進(jìn)樣方法的間隔時(shí)間為50s對(duì)分離的影響圖7多進(jìn)樣方法的間隔時(shí)間為60s對(duì)分離的影響進(jìn)樣間隔時(shí)間分別為10，40，50和60s，其他同2.1.1部分，結(jié)果如圖4~圖8所示。當(dāng)間隔時(shí)間小于40s時(shí)，峰型的重復(fù)性和分離度均因間隔時(shí)間過短而變差，而間隔時(shí)間為10s和40s則可以完全區(qū)分不同的樣品（圖4和圖5），但進(jìn)樣間隔時(shí)間大于40s，樣品峰之間距離進(jìn)一步變大（圖6和圖7），但同時(shí)也增加了進(jìn)樣時(shí)間，所以最終選擇進(jìn)樣間隔時(shí)間40s。2.3連續(xù)多進(jìn)樣次數(shù)的優(yōu)化對(duì)進(jìn)樣次數(shù)進(jìn)行考察，連續(xù)進(jìn)樣次數(shù)分別為1，3，5，7和9次，如圖8所示。結(jié)果表明，當(dāng)進(jìn)樣次數(shù)小于5時(shí)峰面積RSD＜30%的氨基酸個(gè)數(shù)沒有顯著性差異；但大于5時(shí)，時(shí)間窗口的增加，會(huì)出現(xiàn)與其他氨基酸峰的重疊，造成定性定量誤差，并且RSD小于30%，20%和10%的氨基酸個(gè)數(shù)顯著降低。最終選擇進(jìn)樣次數(shù)5次。最終優(yōu)化結(jié)果是樣品基質(zhì)為200mmol/L醋酸銨和2%甲酸溶液，連續(xù)進(jìn)樣次數(shù)5次，連續(xù)進(jìn)樣和間隔帶進(jìn)樣時(shí)間均為40s。圖8不同進(jìn)樣次數(shù)氨基酸峰面積RSD分布圖2.4方法驗(yàn)證方法學(xué)考察結(jié)果見表1。線性范圍為0.0007~6μg/mL，相關(guān)系數(shù)在0.9932~1之間，檢測(cè)限范圍為1.31~11.54μg/kg，精密度小于10%。低、中、高三個(gè)濃度水平的回收率分別為95%~125%，75%~112%和63%~139%，僅蛋氨酸的回收率較低，氧化型谷胱甘肽回收率偏高。


本文編號(hào)：3430262