目的:乳腺癌是危害全球女性健康的第一殺手,化療在乳腺癌的治療過(guò)程中占有重要地位。但是,多藥耐藥（Multi Drug Resistance,MDR）的出現(xiàn)導(dǎo)致化療的失敗,極大地限制了局部晚期和轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療效果。藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）能夠?qū)⒓?xì)胞內(nèi)的化療藥物排出細(xì)胞外,其過(guò)量表達(dá)是MDR產(chǎn)生的主要原因之一。盡管在MDR細(xì)胞中關(guān)于P-gp的表達(dá)調(diào)控已被深入研究,但是目前對(duì)P-gp活性調(diào)控的研究還很少。Rack1（Receptor for Activated C Kinase 1）是細(xì)胞內(nèi)的一種支架蛋白,介導(dǎo)不同蛋白質(zhì)之間的相互作用,在腫瘤細(xì)胞抵抗化療藥物的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。前期研究發(fā)現(xiàn)Rack1是P-gp的一個(gè)結(jié)合蛋白質(zhì),但是Rack1是否調(diào)控P-gp的轉(zhuǎn)運(yùn)活性,目前尚未可知。本研究中,我們利用多藥耐藥的乳腺癌細(xì)胞系,通過(guò)一系列體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn),結(jié)合構(gòu)建體內(nèi)耐藥移植瘤模型,明確耐藥細(xì)胞中Rack1對(duì)P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)泵活性的調(diào)控作用,并進(jìn)一步探究Rack1調(diào)控P-gp活性的分子機(jī)制,為改善臨床晚期耐藥乳腺癌的治療以及尋找新的治療靶點(diǎn)提供線索。方法:1....

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要 Abstract 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明 前言
研究現(xiàn)狀、成果
研究目的、方法 一、Rack1的表達(dá)增加耐藥細(xì)胞對(duì)化療藥物的抵抗
1.1 對(duì)象和方法
    1.1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞系和培養(yǎng)條件
    1.1.2 實(shí)驗(yàn)用儀器、試劑和耗材
    1.1.3 相關(guān)試劑配制
1.2 結(jié)果
    1.2.1 敲減Rack1的表達(dá)增加耐藥細(xì)胞對(duì)表柔比星的敏感性
    1.2.2 敲減Rack1后不改變藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-gp的表達(dá)水平
    1.2.3 敲減Rack1的表達(dá)減弱P-gp的轉(zhuǎn)運(yùn)活性
    1.2.4 敲減Rack1后增加化療藥物在細(xì)胞內(nèi)的蓄積
1.3 討論
1.4 小結(jié) 二、Src激酶活性促進(jìn)腫瘤細(xì)胞耐藥
2.1 對(duì)象和方法
    2.1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞系和培養(yǎng)條件
    2.1.2 實(shí)驗(yàn)用儀器、試劑和耗材
    2.1.3 試劑配制
    2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
2.2 結(jié)果
    2.2.1 Src的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞對(duì)化療藥物的抵抗
    2.2.2 下調(diào)Src的表達(dá)抑制P-gp的轉(zhuǎn)運(yùn)活性
    2.2.3 下調(diào)Src的表達(dá)增加表柔比星的胞內(nèi)蓄積
    2.2.4 抑制Src激酶活性增加細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性
    2.2.5 抑制Src激酶活性減弱P-gp的轉(zhuǎn)運(yùn)能力
    2.2.6 抑制Src激酶活性后增加化療藥物在細(xì)胞內(nèi)的蓄積
2.3 討論
2.4 小結(jié) 三、Rack1介導(dǎo)Src與 P-gp之間的相互作用
3.1 對(duì)象和方法
    3.1.1 實(shí)驗(yàn)用材料
    3.1.2 實(shí)驗(yàn)用儀器、試劑和耗材
    3.1.3 試劑配制
    3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
3.2 結(jié)果
    3.2.1 Rack1/Src/P-gp三者在乳腺癌耐藥細(xì)胞中形成蛋白復(fù)合體
    3.2.2 Rack1的表達(dá)介導(dǎo)Src與 P-gp的相互作用,同時(shí)抑制Cav1與P-gp的結(jié)合
    3.2.3 Src的表達(dá)不影響Rack1與P-gp的相互作用,但能抑制Cav1與P-gp的結(jié)合
    3.2.4 表達(dá)Rack1^Y246F不能介導(dǎo)Src與 P-gp的相互作用,但能增強(qiáng)Cav1結(jié)合P-gp
    3.2.5 Src的激酶活性調(diào)控Cav1的磷酸化
    3.2.6 Src調(diào)控Cav1的磷酸化依賴于Rack1的表達(dá)
    3.2.7 磷酸化的Cav1減弱與P-gp的結(jié)合能力,促進(jìn)P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)活性
3.3 討論
3.4 小結(jié) 四、拯救Rack1^WT的表達(dá)恢復(fù)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的抵抗
4.1 對(duì)象和方法
    4.1.1 實(shí)驗(yàn)用材料
    4.1.2 實(shí)驗(yàn)用儀器、試劑和耗材
    4.1.3 試劑配制
    4.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
4.2 結(jié)果
    4.2.1 耐藥細(xì)胞中拯救Rack1^WT的表達(dá),恢復(fù)對(duì)表柔比星的抵抗
    4.2.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn),敲減Rack1表達(dá)的腫瘤細(xì)胞對(duì)表柔比星的敏感性增加,經(jīng)Rack1^WT拯救的腫瘤細(xì)胞對(duì)表柔比星的治療產(chǎn)生抵抗
4.3 討論
4.4 小結(jié) 全文結(jié)論 論文創(chuàng)新點(diǎn) 參考文獻(xiàn) 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明 綜述 對(duì)腫瘤多藥耐藥與逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的認(rèn)識(shí)
綜述參考文獻(xiàn) 致謝 個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：4033226