第一部分LSD1通過促進(jìn)PTEN泛素化降解抑制成肌細(xì)胞自噬的實驗研究賴氨酸特異性去甲基化酶LSD1能夠脫去組蛋白H3第4位賴氨酸（H3K4）和第9位賴氨酸（H3K9）的單甲基或二甲基發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能。除組蛋白底物外,越來越多的研究表明LSD1也能夠調(diào)控非組蛋白底物發(fā)揮生物學(xué)功能。在成肌細(xì)胞生長以及分化過程中,除通過調(diào)控組蛋白底物發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能外,LSD1是否通過調(diào)控非組蛋白底物調(diào)控成肌細(xì)胞的自噬還未見報道。本研究通過使用LSD1的特異性抑制劑以及si RNA證明,LSD1負(fù)向調(diào)控成肌細(xì)胞C2C12的自噬水平;相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的檢測以及回復(fù)實驗表明,LSD1通過AKT/m TORC1通路作用于自噬的起始階段;進(jìn)一步的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),LSD1的活性抑制導(dǎo)致AKT主要的負(fù)向調(diào)控分子PTEN的蛋白質(zhì)水平升高。LSD1對PTEN蛋白質(zhì)水平的調(diào)控不依賴其轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能,LSD1與PTEN相互結(jié)合并促進(jìn)PTEN蛋白質(zhì)分子的泛素化修飾,導(dǎo)致PTEN的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性降低。以上研究結(jié)果表明,PTEN可能是LSD1新的非組蛋白底物,LSD1通過調(diào)控PTEN的蛋白質(zhì)水平抑制成肌細(xì)胞C2C12自噬的發(fā)生,并在成肌分... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

1LSD1抑制劑SP2509對C2C12細(xì)胞增殖的影響

重慶醫(yī)科學(xué)博研究學(xué)位論23圖1.1.2SP2509處理C2C12細(xì)胞后的免疫印記與qRT-PCR結(jié)果Fig1.1.2WesternblottingandqRT-PCRofC2C12cellsaftertreatmentwithSP2509(*p<0.05,**p<0.01,comparedwithcontrol)2.1.3GSK-LSD1與GSK2879552對LC3B與p62蛋白質(zhì)水平的影響為了排除SP2509脫靶效應(yīng)的可能性，我們應(yīng)用了另外兩種不可逆的抑制劑，GSK-LSD1與GSK2879552（圖1.1.3A）。用不同濃度的GSK-LSD1與GSK2879552處理細(xì)胞48h，結(jié)果顯示GSK-LSD1與GSK2879552對自噬的調(diào)控作用與SP2509類似（圖1.1.3B-C）。表明抑制LSD1去甲基化酶活性能促進(jìn)自噬的產(chǎn)生。圖1.1.3GSK-LSD1與GSK2879552作用后LC3B及p62蛋白質(zhì)水平的變化Fig1.1.3TheproteinlevelsofLC3Bandp62ofC2C12cellsaftertreatmentwithLSD1inhibitorGSK-LSD1andGSK28795522.1.4敲減LSD1增加C2C12細(xì)胞LC3B-II的水平為了進(jìn)一步驗證LSD1與自噬的調(diào)控關(guān)系，我們在C2C12細(xì)胞中應(yīng)用了兩種

重慶醫(yī)科學(xué)博研究學(xué)位論23圖1.1.2SP2509處理C2C12細(xì)胞后的免疫印記與qRT-PCR結(jié)果Fig1.1.2WesternblottingandqRT-PCRofC2C12cellsaftertreatmentwithSP2509(*p<0.05,**p<0.01,comparedwithcontrol)2.1.3GSK-LSD1與GSK2879552對LC3B與p62蛋白質(zhì)水平的影響為了排除SP2509脫靶效應(yīng)的可能性，我們應(yīng)用了另外兩種不可逆的抑制劑，GSK-LSD1與GSK2879552（圖1.1.3A）。用不同濃度的GSK-LSD1與GSK2879552處理細(xì)胞48h，結(jié)果顯示GSK-LSD1與GSK2879552對自噬的調(diào)控作用與SP2509類似（圖1.1.3B-C）。表明抑制LSD1去甲基化酶活性能促進(jìn)自噬的產(chǎn)生。圖1.1.3GSK-LSD1與GSK2879552作用后LC3B及p62蛋白質(zhì)水平的變化Fig1.1.3TheproteinlevelsofLC3Bandp62ofC2C12cellsaftertreatmentwithLSD1inhibitorGSK-LSD1andGSK28795522.1.4敲減LSD1增加C2C12細(xì)胞LC3B-II的水平為了進(jìn)一步驗證LSD1與自噬的調(diào)控關(guān)系，我們在C2C12細(xì)胞中應(yīng)用了兩種

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3590311