發(fā)布時間：2021-09-29 18:58

　　目的:對馬鹿茸多肽進(jìn)行分離純化,獲得不同分子量的馬鹿茸多肽（A～E）。研究馬鹿茸多肽（A～E）對MC3T3-E1成骨細(xì)胞的增殖及成骨分化作用、對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖及骨向分化的作用;馬鹿茸多肽A對大鼠腎虛型骨質(zhì)疏松癥的作用,探究馬鹿茸防治骨質(zhì)疏松癥的作用機(jī)制。通過HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)分析馬鹿茸多肽A的組分組成,采用原子力顯微鏡對馬鹿茸多肽A的表面結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析和表征,采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和生物信息學(xué)分析方法,探究馬鹿茸多肽A防治骨質(zhì)疏松癥的靶基因和靶蛋白,及相關(guān)的作用機(jī)制的信號通路,為防治骨質(zhì)疏松癥提供理論依據(jù)和科學(xué)指導(dǎo)。材料與方法:1材料鹿茸藥材購于遼寧西豐藥材市場,經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室的李峰教授鑒定為鹿科動物馬鹿Cervus elaphus Linnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角;馬鹿茸多肽,由實驗室自制。2方法2.1馬鹿茸多肽（A～E）的分離純化及分子量的分布測定采用多級膜分離技術(shù)分離并純化得到5種不同分子量的馬鹿茸多肽（A～E）;采用高效凝膠過濾色譜法和SDS-PAGE電泳法測定馬鹿茸多肽（A～E）的分子量。2.2馬鹿茸多肽（A～E）對MC3T3-E1成骨細(xì)胞的增殖及... 

【文章來源】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：215 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

馬鹿茸多肽A的粉末

馬鹿茸多肽“補(bǔ)腎健骨”作用與機(jī)制研究243.2供試品溶液的測定結(jié)果由表1-2和圖1-8，可知多肽組分的分子量在1000-20000Da范圍內(nèi)。表1-2酶解液中多肽組分信息保留時間/min分子量/Da10.254722609.910.768318646.611.361615194.9

馬鹿茸多肽“補(bǔ)腎健骨”作用與機(jī)制研究28多肽溶液與2X上樣緩沖溶液等量混合，與沸水中反應(yīng)5min后取出，冷卻至室溫后備用。2.4電泳條件不連續(xù)緩沖系統(tǒng)，內(nèi)槽裝陰極緩沖溶液，外槽裝陽極緩沖溶液。上樣前60V恒壓預(yù)電泳10min。隨后60V恒壓電泳至濃縮膠電泳完畢，樣品被壓縮成一條直線，進(jìn)入間隙膠后用100V恒壓電泳，達(dá)到分離膠后用120V恒壓電泳，當(dāng)溴酚藍(lán)指示劑前沿跑到距膠底端1cm處，停止電泳。2.5上樣用微量注射器吸取10μL對照marker和與上樣緩沖溶液均勻混合后的多肽溶液，加入點樣孔。2.6固定、染色和脫色將電泳完畢后的凝膠取出立即放入固定液中固定30min，然后放入考馬斯亮藍(lán)染色液中，置搖床上振搖過夜，水淋洗后用脫色液脫色直至凝膠背景脫去為止，放入保存液中儲存。3實驗結(jié)果1KD圖1-9電泳圖注：左側(cè)是marker；右側(cè)是樣品50KDa10KDa0.5KDa0.4KDa0.3KDa0.01KDa

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]核桃低聚肽對亞健康大鼠氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的影響[J]. 劉睿,康家偉,珠娜,張亭,王天星,杜倩,張黎,李勇.  食品工業(yè)科技. 2020(04)
[2]不同級分綠豆肽免疫活性的分析[J]. 刁靜靜,遲治平,劉妍兵,曲柳青,張麗萍.  食品科學(xué). 2020(01)
[3]蜜蜂肽對育肥湖羊生長性能和瘤胃微生物區(qū)系的影響[J]. 張智安,李世易,武剛,李發(fā)弟,李飛.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2020(02)
[4]伊枯草菌素類抗菌肽抑菌活性及機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 鄧永卓,張家寧,鄧爽,趙心宇,李曉巖,牛犇.  中國抗生素雜志. 2020(07)
[5]袋鼠皮多肽對H2O2誘導(dǎo)人肝細(xì)胞LO2氧化損傷的影響[J]. 王碧雪,祝雅雯,何慶,趙晶華,陳清西.  廈門大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2019(05)
[6]鹿瓜多肽對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、遷移和抗炎因子分泌的影響[J]. 李世梅,王黎明,李銘,湯慧,李峰,劉文聘,潘志榮.  醫(yī)學(xué)綜述. 2019(19)
[7]我國已上市治療用重組蛋白多肽類產(chǎn)品分析[J]. 辛中帥,張彥彥,晉小雁,楊建紅.  中國藥事. 2019(09)
[8]杜仲治療骨質(zhì)疏松的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作用機(jī)制探討[J]. 董航,嚴(yán)嬌,謝銥子,紀(jì)樹亮,孫偉鵬,孫治中,李宗瑤.  廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2019(09)
[9]鹿瓜多肽聯(lián)合雙醋瑞因治療膝骨關(guān)節(jié)炎的療效[J]. 周歡斌.  骨科臨床與研究雜志. 2019(05)
[10]骨代謝組學(xué)在中醫(yī)藥治療骨質(zhì)疏松癥應(yīng)用概況[J]. 楊杰,孫宇,聶士超,陳崇民.  遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2019(08)

博士論文
[1]桃葉珊瑚苷通過Nrf2/Keapl信號通路促進(jìn)成骨細(xì)胞分化抑制骨質(zhì)疏松作用的研究[D]. 李雨桐.吉林大學(xué) 2019
[2]螺旋藻蛋白源生物活性肽的制備及其抗皮膚光老化機(jī)理研究[D]. 曾巧輝.華南理工大學(xué) 2016
[3]螺旋藻抗菌肽的純化鑒定及其抑菌機(jī)理的研究[D]. 孫宜君.北京林業(yè)大學(xué) 2016

碩士論文
[1]基于BMP2/Smad1/Runx2/Osterix通路探討健骨顆粒氯仿萃取部位對體外成骨細(xì)胞分化的影響[D]. 孫雨晴.福建中醫(yī)藥大學(xué) 2018
[2]馬鹿茸多肽的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D]. 趙麗莉.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 2018
[3]淫羊藿次苷Ⅱ促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化及相關(guān)基因表達(dá)的研究[D]. 范亞楠.河南中醫(yī)藥大學(xué) 2018
[4]基于Nrf-2/HO-1/NF-κB信號通路探討龜鹿二仙膠抗骨質(zhì)疏松實驗研究[D]. 徐衛(wèi)峰.南京醫(yī)科大學(xué) 2017
[5]奶山羊胎盤抗氧化多肽制備及其功能活性研究[D]. 高閃閃.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[6]馬鹿茸多肽的提取分離及性質(zhì)研究[D]. 張微.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 2017
[7]綠原酸通過Shp2/PI3/Akt信號通路防治去卵巢大鼠獲得性骨質(zhì)疏松癥[D]. 毛玉琳.南昌大學(xué) 2016
[8]枸杞ACE抑制肽的提取、分離純化、活性測定及其結(jié)構(gòu)鑒定[D]. 陳琨.寧夏醫(yī)科大學(xué) 2016
[9]仙茅苷通過FoxO1保護(hù)氧化損傷成骨細(xì)胞的作用機(jī)制及體內(nèi)代謝研究[D]. 何勇靜.第二軍醫(yī)大學(xué) 2015
[10]福莫特羅和ICI118551對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源的成骨樣細(xì)胞增殖和分化的影響[D]. 胡安全.南京醫(yī)科大學(xué) 2009



本文編號：3414281