研究背景及目的卵巢功能異常是導致子宮內膜異位癥(endometriosis,EMS)患者妊娠結局不佳的重要原因之一。EMS不孕患者卵泡液中孕酮(progesterone,P4)水平改變可引起卵泡發(fā)育障礙、卵母細胞質量下降從而影響胚胎發(fā)育潛能。既往研究發(fā)現參與自噬調控的重要基因Beclin-1(BECN1)與EMS的發(fā)生發(fā)展之間存在密切的聯系,但BECN1在EMS卵巢顆粒細胞中的表達及其對卵巢功能的影響目前尚不明確。因此,本研究旨在探討B(tài)ECN1對EMS不孕患者卵巢顆粒細胞孕酮合成的調控及其作用機制。研究方法1.選取26例腹腔鏡診斷EMS的不孕患者和29例單純輸卵管因素不孕的對照組患者納入研究,收集穿刺取卵抽吸出的卵泡液。2.通過臨床數據統(tǒng)計分析,比較兩組患者的基本資料以及優(yōu)胚率。3.自卵泡液中分離純化顆粒細胞,采用蛋白質印跡分析、電子顯微鏡、免疫熒光以及實時熒光定量PCR檢測兩組患者顆粒細胞中BECN1的表達及自噬水平。4.通過電化學發(fā)光免疫分析(electrochemiluminescence immunoassay,ECLIA)技術檢測兩組患者卵泡液中的孕酮濃度;采用蛋白質印跡分析和...

【文章頁數】：141 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
中文部分
    緒論
    第一部分 自噬相關基因Beclin-1 在子宮內膜異位癥患者卵巢顆粒細胞中的表達
        1.1 引言
        1.2 材料與方法
            1.2.1 主要試驗儀器
            1.2.2 主要試劑和溶液
            1.2.3 研究對象
            1.2.4 卵泡液的收集和卵巢顆粒細胞的提取
            1.2.5 蛋白質印跡分析
            1.2.6 電子顯微鏡
            1.2.7 免疫熒光實驗
            1.2.8 總RNA提取和反轉錄
            1.2.9 實時熒光定量PCR實驗
            1.2.10 血清類固醇激素的檢測
            1.2.11 胚胎級別評定方法及優(yōu)胚率計算
            1.2.12 統(tǒng)計學分析
        1.3 結果
            1.3.1 納入研究對象的一般情況與臨床結局
            1.3.2 EMS組和對照組卵巢顆粒細胞中自噬相關蛋白的表達水平
            1.3.3 EMS組和對照組卵巢顆粒細胞中自噬溶酶體的數量
            1.3.4 EMS組和對照組卵巢顆粒細胞中LC3 的點狀聚集
            1.3.5 EMS組和對照組卵巢顆粒細胞中自噬相關基因的mRNA表達水平
        1.4 討論
        1.5 小結
    第二部分 Beclin-1 在子宮內膜異位癥患者卵巢顆粒細胞孕酮合成中的作用及機制研究
        2.1 引言
        2.2 材料與方法
            2.2.1 主要試驗儀器
            2.2.2 主要試劑和溶液
            2.2.3 研究對象
            2.2.4 卵泡液的收集和卵巢顆粒細胞的提取
            2.2.5 卵泡液和細胞培養(yǎng)上清液孕酮測定
            2.2.6 卵巢顆粒細胞的培養(yǎng)和處理
            2.2.7 總蛋白提取和蛋白質印跡分析
            2.2.8 總RNA提取和反轉錄以及實時熒光定量PCR實驗
            2.2.9 siRNA干擾實驗
            2.2.10 細胞活性檢測
            2.2.11 膽固醇檢測實驗
            2.2.12 慢病毒感染實驗
            2.2.13 質粒轉染實驗
            2.2.14 統(tǒng)計學分析
        2.3 結果
            2.3.1 EMS組和對照組卵泡液中的孕酮水平和顆粒細胞孕酮合成關鍵酶的表達情況
            2.3.2 BECN1 敲低對卵巢顆粒細胞孕酮合成的影響
            2.3.3 卵巢顆粒細胞中LDL誘導的孕酮合成及其關鍵酶的表達
            2.3.4 BECN1在LDL誘導卵巢顆粒細胞孕酮合成中的調控作用
            2.3.5 BECN1 過表達對卵巢顆粒細胞孕酮合成的影響
            2.3.6 BECN1與STAR mRNA和獲卵數相關性
        2.4 討論
        2.5 小結
    全文總結
    參考文獻
英文部分
    Introduction
    Part Ⅰ Expression of Autophagy-related Gene Beclin-1 in Granulosa Cells of Patients with Endometriosis
        1.1 Introduction
        1.2 Materials and methods
        1.3 Results
        1.4 Discussion
        1.5 Summary
    Part Ⅱ The Roles and Mechanisms of Beclin-1 in Progesterone Synthesis in Granulosa Cells of Patients with Endometriosis
        2.1 Introduction
        2.2 Materials and methods
        2.3 Results
        2.4 Discussion
        2.5 Summary
    Conclusions
    References
致謝
攻讀博士學位期間發(fā)表(錄用)的學術論文
八年制學位論文要求



本文編號：4011458