研究背景和目的:癌癥是全球最主要的公共衛(wèi)生問題。肺癌的發(fā)病率和死亡率在眾多類型的癌癥中一直位居前列,是對人類健康威脅最大的腫瘤之一�；熓欠伟┲委煹闹匾侄�,而順鉑目前仍作為肺癌治療的一線用藥被廣泛使用。對順鉑細胞毒性機制以及耐藥機制的研究由來已久,現(xiàn)如今程序性壞死這一新的細胞程序性死亡形式的出現(xiàn),給順鉑相關(guān)機制的研究帶來了新的方向。已有研究表明,順鉑可以誘導(dǎo)細胞發(fā)生程序性壞死,但能否通過誘導(dǎo)程序性壞死殺傷肺癌細胞仍無報道。眾所周知,細胞凋亡抵抗是順鉑耐藥的重要機制,細胞程序性壞死抵抗是否促進肺癌細胞對順鉑產(chǎn)生耐藥目前卻并不完全清楚。本課題擬針對以上兩個關(guān)鍵問題進行研究。本課題分為三個部分:第一部分,順鉑誘導(dǎo)肺癌細胞程序性壞死及機制研究研究方法:1)光鏡或電鏡觀察死亡細胞情況與形態(tài);2)MTT法、LDH釋放實驗和流式細胞術(shù)檢測藥物處理的細胞毒性;3)Western blotting檢測相關(guān)分子蛋白水平的改變;4)q-PCR檢測相關(guān)分子mRNA水平的改變;5)細胞免疫熒光染色檢測藥物處理后相應(yīng)分子表達或分布的改變;6)ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清中TNF-α含量;7)免疫組織化學(xué)染色檢測... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

程序性壞死信號通路示意圖[18]

空軍軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文-18-圖2小鼠MLKL蛋白結(jié)構(gòu)示意圖[20]MLKL蛋白N端四螺旋束用品紅色顯示，支柱區(qū)域用青色顯示，C端激酶樣結(jié)構(gòu)域用綠色顯示�；钚匝酰≧eactiveoxygenspecies，ROS）對于程序性壞死的貢獻一直是程序性壞死研究的重要方面。線粒體的有氧呼吸和代謝過程是機體產(chǎn)生ROS的主要途徑，因此線粒體ROS與程序性壞死之間的關(guān)系更是研究重點。有研究表明，TNF-α介導(dǎo)的RIPK1活化可導(dǎo)致線粒體功能障礙以及ROS的產(chǎn)生，這一過程參與TNF-α誘導(dǎo)的細胞程序性壞死[28]。相應(yīng)地，用抗氧化劑清除ROS可抑制程序性壞死[29]。除此之外，誘導(dǎo)程序性壞死后，RIPK3可作用于線粒體上與細胞呼吸或代謝相關(guān)的酶，如丙酮酸脫氫酶復(fù)合體（Pyruvatedehydrogenasecomplex，PDC）和谷氨酸脫氫酶1（Glutamatedehydrogenase1，GLUD1），并提高它們的活性，進而使得ROS水平上升[30,31]。事實上，程序性壞死發(fā)生時ROS的產(chǎn)生并不完全來源于線粒體，質(zhì)膜相關(guān)的NADPH氧化酶1（NADPHoxidase1，NOX1）復(fù)合物也可成為ROS的來源[32]。RIPK3也可與位于細胞漿的代謝酶發(fā)生相互作用，如谷氨酰胺連接酶（Glutamate-ammonialigase，GLUL）和肝糖原磷酸化酶（Glycogenphosphorylase,liverform，PYGL），使得ROS增加[31]。ROS的增加反過來也會促進程序性壞死，其可能機制為ROS激活RIPK1第161位絲氨酸的自磷酸化，繼而促進壞死小體的形成[33,34]。不過值得注意的是，也并非所有研究都支持ROS特別是線粒體ROS在程序性壞死中的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，抗氧化劑丁基羥基茴香醚（Butylatedhydroxyanisole，BHA）不能抑制Jurkat細胞發(fā)生程序性壞死，說明氧化應(yīng)激可能不在程序性壞死信號通路中發(fā)揮重要作用[7]。另外也有研究認為，線粒體ROS的產(chǎn)生只是程序性壞死的伴隨現(xiàn)象，?

程序性壞死與癌癥關(guān)系示意圖[78]

【參考文獻】：
博士論文
[1]CD147-Annexin A2相互作用調(diào)控腫瘤細胞運動的分子機制研究[D]. 崔洪勇.第四軍醫(yī)大學(xué) 2015



本文編號：3407019