巨噬細胞是一種多功能免疫細胞,在機體的特異性和非特異性免疫反應中均發(fā)揮重要作用。除了吞噬異物、提呈抗原以及炎癥反應等全身效應,巨噬細胞在局部組織的浸潤情況與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關。尤其是腫瘤組織局部浸潤的巨噬細胞,可通過調控腫瘤的侵襲和轉移影響患者預后,但相關機制尚未明確。研究調控巨噬細胞的增殖、分化以及功能極化的分子機制,將有助于闡明其與腫瘤發(fā)生發(fā)展的相關性,并為靶向腫瘤巨噬細胞相關的腫瘤免疫治療提供新靶點。RIOK3（RIO Kinase 3）是一種非典型絲蘇氨酸蛋白激酶,與RIOK1、RIOK2一起同屬于RIO（right open reading frame）家族的一員。有研究表明,RIOK3與Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生、NF-κB信號轉導通路、Hedgehog信號轉導通路以及Akt/mTOR通路的活化有關,并參與調控細胞免疫功能和細胞增殖。mRNA表達譜分析結果表明RIOK3在髓系細胞中呈現(xiàn)高表達,提示該蛋白可能參與了巨噬細胞的相關功能。利用我們已經(jīng)建立的巨噬細胞RIOK3特異性敲除小鼠（LysM Cre RIOK3 LoxP/LoxP,以下簡寫為RIOK3-/-）、惡性黑色素瘤原... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．２巨噬細胞增殖相關基因表達

正文第一部分結果??對照組密集，用ＩｍａｇｅＪ計數(shù)細胞提示單位面積內實驗組細胞所占總面積的比例高??于對照組（圖１．３?Ａ－Ｂ）。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＲＪＯＫ３７－??ＣｅＵ＿ｔｅｒｑ＿－Ｕｏｎ?鱗．濟＇興：??Ｉ］?＊??ｆａ?■＿??＾?瞧曬??ｉ?－〇－?ｉｒｉ：ｘｒ??ｒ?＾?＿雜．，趕纖＿｜｜??乂?＃?＃?＃??圖１．３細胞增殖實驗。Ａ．ＩｍａｇｅＪ定量Ｂ中紫色染色的細胞面積占比（ｎ?＝?６）；?Ｂ．與??ＣＣＫ８結果對應的光鏡下結晶紫染色細胞分布（４０Ｘ）；Ｃ．巨噬細胞在Ｍ－ＣＳＦ?１０ｎｇ／??ｍｌ?體外培養(yǎng)?７?天中?ＣＣＫ８?吸光度值（ｎ?＝?６，?＊?ｐ＜０＿０５，?＊＊?ｐ＜０．０１，＊＊＊?ｐ＜０．００１）??隨后為了進一步了解巨噬細胞在體外培養(yǎng)過程中細胞分裂的情況，采用ＣＦＳＥ??染色提取后的骨髓細胞，記錄時間為ＤａｙＯ，流式細胞技術檢測Ｄａｙｌ、３、５、７時??４８８ｍｎ激發(fā)光下發(fā)射的信號。結果提示，敲除ＲＩＯＫ３的巨噬細胞其發(fā)生分裂的比??例與平均每個細胞分裂的次數(shù)均高于對照組（圖１．４），在Ｄａｙ３時ＲＩＯＫ３－／－組的細??胞幾乎都已分裂（ｍｅａｎＤｉｖｓｉｏｎｒａｔｅ?＝?９８．４３％），且每個細胞平均分裂達１．４６次（ｍｅａｎ??２８??

用流式細胞儀檢測信號結果提示ＲＩ〇Ｋ３＾組Ｄａｙ４、５、６、７培養(yǎng)的巨噬細胞處于??Ｇ０／Ｇ１期的細胞均低于對照組，相對的Ｓ期和Ｇ２期細胞比例總和則高于對照組??（圖１．５），說明實驗組處于活躍分裂的細胞比例要高于對照組。Ｄａｙ５的細胞處于活??２９??


本文編號：3402540