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CT55在結(jié)腸炎相關(guān)腫瘤中的作用機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2021-09-21 23:25
  結(jié)直腸癌(CRC)作為一種常見的消化道惡性腫瘤,在全球范圍內(nèi)具有較高的發(fā)生率。近年來(lái),我國(guó)結(jié)直腸癌發(fā)病率也呈現(xiàn)出不斷上升的趨勢(shì)。研究表明,CRC的發(fā)病大多與環(huán)境因素有關(guān),僅有20-30%的CRC病例與家族遺傳相關(guān)。在炎癥性腸病背景下發(fā)生的結(jié)直腸癌則稱為結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌(CAC),CAC作為CRC的一種亞型,也是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)之一。在先前對(duì)癌睪丸抗原(CT抗原)的研究中,研究者發(fā)現(xiàn)CT抗原在多種腫瘤包括結(jié)直腸癌的免疫治療中扮演著重要的角色。CT55作為潛在的CT抗原,研究報(bào)道其在結(jié)直腸癌中顯著表達(dá),然而,對(duì)于它在CAC中的功能和作用機(jī)制卻仍然未知。本論文中,我們借助體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn),首次探索了CT55在CAC中的功能和作用機(jī)制。先前已有大量文獻(xiàn)報(bào)道CT抗原能在多種腫瘤組織中表達(dá),在結(jié)直腸癌相關(guān)的研究中,人們發(fā)現(xiàn)大量CT抗原如MAGE和SSX家族成員在結(jié)直腸癌中顯著表達(dá)。在本課題中,我們首先對(duì)收集到的12對(duì)臨床結(jié)直腸癌病人的癌組織以及鄰近非癌組織樣品進(jìn)行熒光定量PCR分析,發(fā)現(xiàn)CT55在6對(duì)癌組織樣品中表達(dá)顯著上升。同時(shí),為了驗(yàn)證CT55腫瘤抗原的表達(dá)特性,我們檢測(cè)了CT55在小鼠各個(gè)正... 

【文章來(lái)源】:武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】:107 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 結(jié)直腸癌研究現(xiàn)狀
        1.1.1 結(jié)直腸癌的癌變因素
        1.1.2 結(jié)直腸癌的治療
        1.1.3 結(jié)腸炎相關(guān)的結(jié)直腸癌
        1.1.4 結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制
    1.2 CT55 研究現(xiàn)狀
        1.2.1 腫瘤睪丸抗原
        1.2.2 CT55 的發(fā)現(xiàn)
        1.2.3 CT55 的研究現(xiàn)狀
    1.3 NF-κB信號(hào)通路
        1.3.1 NF-κB信號(hào)成員及其調(diào)控
        1.3.2 經(jīng)典和非經(jīng)典NF-κB通路
        1.3.3 NF-κB和癌癥
    1.4 Cas9 基因編輯技術(shù)
        1.4.1 基因編輯技術(shù)簡(jiǎn)介
        1.4.2 Cas9 基因編輯技術(shù)原理
    1.5 小鼠結(jié)腸癌模型
2 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 腸癌組織樣品
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞和菌株
        2.1.4 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.1.5 主要抗體
        2.1.6 試劑和耗材
        2.1.7 儀器和設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 克隆構(gòu)建
        2.2.2 多克隆抗體制備
        2.2.3 RNA提取、反轉(zhuǎn)錄及熒光定量PCR
        2.2.4 Ct55 敲除小鼠的獲得
        2.2.5 小鼠AOM/DSS誘導(dǎo)的腸癌模型
        2.2.6 小鼠DSS誘導(dǎo)的腸炎模型
        2.2.7 組織學(xué)染色
        2.2.8 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        2.2.9 Cas9 制備CT55 敲除細(xì)胞系
        2.2.10 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.12 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.2.13 KEGG通路和基因富集分析
        2.2.14 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.2.15 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.2.16 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        2.2.17 蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        2.2.18 基因組提取
        2.2.19 生物學(xué)軟件
        2.2.20 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    3.1 前言
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 CT55 多克隆抗體制備
        3.2.2 CT55 在腸癌中表達(dá)升高
        3.2.3 Ct55 敲除小鼠制備
        3.2.4 敲除Ct55 可減輕AOM/DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎相關(guān)腫瘤的發(fā)生
        3.2.5 Ct55 敲除小鼠腫瘤形成中炎癥反應(yīng)減輕
        3.2.6 Ct55 敲除抑制小鼠CAC腫瘤細(xì)胞的增殖
        3.2.7 CT55 缺失抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的致瘤特征
        3.2.8 CT55對(duì)CAC的影響依賴于NF-κB信號(hào)通路
        3.2.9 CT55 促進(jìn)TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB的激活
        3.2.10 CT55和IKK相互作用
        3.2.11 CT55 調(diào)節(jié)IκBα的蛋白穩(wěn)定性和p65 的核定位
        3.2.12 CT55對(duì)NF-κB的調(diào)控依賴于IKK
    3.3 討論與展望
參考文獻(xiàn)
縮略詞表
攻讀博士期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]Association of type 2 diabetes mellitus and the risk of colorectal cancer: A meta-analysis and systematic review[J]. Salman Yousuf Guraya.  World Journal of Gastroenterology. 2015(19)
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[3]Advances and new perspectives in the treatment of metastatic colon cancer[J]. Gonzalo Recondo Jr,Enrique Díaz-Cantón,Máximo de la Vega,Martin Greco,Gonzalo Recondo Sr,Matias E Valsecchi.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2014(07)
[4]Expression of nuclear factor-kappa B and target genes in gastric precancerous lesions and adenocarcinoma:Association with Helicobactor pylori cagA (+) infection[J]. Gui-Fang Yang Chang-Sheng Deng Yong-Yan Xiong Ling-Ling Gong Bi-Cheng Wang Jun Luo Department of Pathology,Zhongnan Hospital,Wuhan University,Wuhan 430071,Hubei Province,ChinaDepartment of Gastroenterology,Zhongnan Hospital,Wuhan University,Wuhan 430071,Hubei Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2004(04)



本文編號(hào):3402696

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