研究背景與目的:激素抵抗型腎病綜合征（SRNS）致病因素復(fù)雜,臨床治療較為棘手,療效不盡如人意,隨著病情的變化,常易發(fā)展為終末期腎病而危及患者的生命。足細(xì)胞損傷與慢性腎病發(fā)生、發(fā)展密切關(guān)聯(lián),足細(xì)胞相關(guān)蛋白、基因突變及表達(dá)異常是SRNS發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。有研究表明,miRNA表達(dá)失調(diào)與腎病有關(guān),成熟的Dicer酶可以通過一些非編碼的微小RNA來介導(dǎo)調(diào)節(jié)SD分子的應(yīng)答。故調(diào)控Dicer-miRNA通路,使SD分子的表達(dá)得以改善,減少蛋白尿。右歸丸可通過減毒增敏來減緩SRNS腎病足細(xì)胞的損傷,發(fā)揮減少尿蛋白和保護(hù)腎臟的作用,其分子機(jī)制尚未完全闡明。方法:1.64只雄性SPF級Wistar大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,按體重隨機(jī)分為空白組（Control,12只）和造模組（52只）。造模成功后隨機(jī)分為模型組（Model）;潑尼松組（PAT）;潑尼松+右歸丸高、中、低組（PAT+YGh、PAT+YGm、PAT+YGl）。一次性尾靜脈注射阿霉素6mg/kg（10mg/支,用0.9%氯化鈉溶液2ml稀釋成濃度為5mg/ml）,同時給予臀部肌肉注射氫化可的松25mg/kg/d（50mg/支,用0.9%氯化鈉2ml... 

【文章來源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：137 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

Nephrin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路示意圖

基于miRNA探討右歸丸對激素抵抗型腎病綜合征大鼠的增敏作用及機(jī)制研究16族中miRNA的研究成為防治多種疾病的熱點(diǎn)。圖2microRNA生物合成及作用機(jī)制單鏈非編碼小RNA在動物中高度保守，在臟器組織中的分布具有器官特異性。在腎臟中，miRNA與腎臟發(fā)育、體內(nèi)平衡和生理功能關(guān)系密切。腎臟中特異性miRNA出現(xiàn)特異的缺失或者低表達(dá)時，它們通過調(diào)控一些相關(guān)的靶基因，影響一些特異性蛋白的表達(dá)。大量實驗研究表明[56-58]，在腎臟病的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中miRNA發(fā)揮重要作用。miRNA參與了足細(xì)胞生物學(xué)過程，包括細(xì)胞增殖、凋亡和分化，同時能維護(hù)腎小球濾過屏障的完整性。當(dāng)miRNA所調(diào)控的下游基因網(wǎng)絡(luò)出現(xiàn)異常時，腎小球逐漸呈現(xiàn)硬化，進(jìn)行性蛋白尿隨之產(chǎn)生。同時，miRNA變化也會影響足細(xì)胞骨架蛋白的表達(dá)[59-61]，足細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能異常是SRNS產(chǎn)生的關(guān)鍵因素。近年來，越來越多的研究證明[62]，一些特異性成熟的miRNAs與足細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能損傷有關(guān)。3.2miRNA與足細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)腎臟病理類型是臨床對不同類型腎臟病的有效依據(jù)，腎病綜合征各種病理類型都有可能出現(xiàn)激素抵抗，但最主要的病理類型是膜性腎病（membranousnephropathy，MN）和局灶節(jié)段性腎小球硬化(focalsegementaiglomerulosclerosis，F(xiàn)SGS）[63]。足細(xì)胞的病變是局灶性節(jié)段性腎小球硬化的主要病理機(jī)制[64]，而miRNA在維持足細(xì)胞生理平衡和調(diào)控激素治療方面有不可代替的作用。研究發(fā)現(xiàn)，mir-30家族在FSGS足細(xì)胞中表達(dá)下

基于miRNA探討右歸丸對激素抵抗型腎病綜合征大鼠的增敏作用及機(jī)制研究461.5基因芯片檢測腎皮質(zhì)miRNA的表達(dá)各組大鼠腎皮質(zhì)差異性miRNAs的篩選，我們選用AffymetrixmiRNA4.0芯片來檢查分析。芯片對miRBasev200100%的全覆蓋；涵蓋了所有物種成熟信息RNA30424個；其中包括人、小鼠和大鼠mRNA5214條；并且包括人類snoRNA和scaRNA1996多條，370個探針組用于檢測人與鼠類的premrnA發(fā)夾序列。AffymetrixmiRNA表達(dá)譜微陣列檢測，先從待檢測樣品中提取總RNA，然后GenisphereFlashTag生物素標(biāo)記。生物素標(biāo)記原理見圖7。主要步驟如下：(1)我們把用50mMTris-HCl與250mMNaCl及10mMMgCl2在pH7.9、溫度25℃的實驗條件下配成Poly(A)聚合酶反應(yīng)緩沖液1份A，然后37℃且pH7.9的實驗條件條加入1mMATP在為37℃水中溫育十分鐘；（2）然后對micRNA在生物素標(biāo)記的3DNAdendrimer在連接酶的作用下連接RNA的polyA尾上進(jìn)行標(biāo)記；(3)在連接酶引導(dǎo)下3DNAdendrimer加尾于polyA；(4)芯片在雜交液中雜交，bufferA洗液洗滌，染色后通過熒光檢測并進(jìn)行圖像掃描。1.5.1各組樣品總RNA的提娶質(zhì)檢和純化圖7樣品RNA生物素標(biāo)記的原理

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]右歸丸干預(yù)腎間質(zhì)纖維化的作用及機(jī)制研究[D]. 陳葉香.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2016



本文編號：3336167