第一部分:富含亮氨酸重復(fù)序列的G蛋白偶聯(lián)受體5在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其在腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為中的效應(yīng)目的:此部分旨在分析富含亮氨酸重復(fù)序列的G蛋白偶聯(lián)受體5（Lgr5）在肝細(xì)胞癌（HCC）中的表達(dá)量,探討Lgr5的表達(dá)量與患者的臨床病理資料以及預(yù)后的關(guān)系,觀察Lgr5對腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的效應(yīng)。方法:采用實(shí)時熒光定量PCR（RT-qPCR）以及免疫印跡分析檢測肝癌細(xì)胞系和肝細(xì)胞癌組織樣本中Lgr5的達(dá)水平。通過免疫組織化學(xué)檢測臨床收集的肝細(xì)胞癌樣本中Lgr5的表達(dá)情況。結(jié)合Lgr5的表達(dá)情況與收集到的肝癌患者的臨床病理資料分析兩者之間的相關(guān)性。通過Kaplan–Meier生存曲線分析Lgr5表達(dá)量水平與肝癌患者預(yù)后的聯(lián)系。建立COX回歸模型與單/多因素分析判別Lgr5是否為肝癌預(yù)后的獨(dú)立因素。在肝癌細(xì)胞系SK-Hep1和HepG2中對Lgr5基因過表達(dá)或基因沉默,從而通過Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的侵襲遷移能力,CCK8（Cell Counting Kit-8）細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的增值能力,免疫印跡法分析上皮-間質(zhì)化（epithelial–mesenchymal... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
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論文創(chuàng)新點(diǎn)
中文摘要
Abstract
1.引言
第一部分：富含亮氨酸重復(fù)序列的G蛋白偶聯(lián)受體5在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其在腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為中的效應(yīng)
    2.材料與方法
        2.1 臨床樣本
        2.2 細(xì)胞株
        2.3 實(shí)驗(yàn)動物
        2.4 主要儀器
        2.5 主要試劑
        2.6 主要溶液的配制
        2.7 實(shí)驗(yàn)方法
    3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 Lgr5 在肝細(xì)胞癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2 Lgr5 在肝細(xì)胞癌組織的表達(dá)與臨床病理資料和預(yù)后的關(guān)系
        3.3 Lgr5 可以推動肝癌細(xì)胞的EMT進(jìn)程以及促進(jìn)細(xì)胞的侵襲遷移與生長
        3.4 Lgr5 可以提高腫瘤細(xì)胞對阿霉素的耐藥性
    4.討論
第二部分：富含亮氨酸重復(fù)序列的G蛋白偶聯(lián)受體5與程序性細(xì)胞死亡蛋白5 的之間的相互作用
    5.材料與方法
        5.1 細(xì)胞株
        5.2 主要儀器
        5.3 主要試劑
        5.4 主要溶液的配制
        5.5 實(shí)驗(yàn)方法
    6.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.1 篩選驗(yàn)證Lgr5 的相互作用蛋白
        6.2 Lgr5與PDCD5 的結(jié)合位點(diǎn)在Lgr5 蛋白N端△22-561段
        6.3 PDCD5 在肝癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)
        6.4 PDCD5 在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與臨床病理資料以及預(yù)后的相關(guān)性
        6.5 PDCD5 過表達(dá)可以部分逆轉(zhuǎn)Lgr5 介導(dǎo)的藥物耐受
    7.討論
第三部分：富含亮氨酸重復(fù)序列的G蛋白偶聯(lián)受體5通過競爭性結(jié)合程序性細(xì)胞死亡蛋白5調(diào)控肝癌細(xì)胞的化療耐藥
    8.材料與方法
        8.1 臨床樣本
        8.2 細(xì)胞株
        8.3 主要儀器
        8.4 主要試劑
        8.5 主要溶液的配制
        8.6 實(shí)驗(yàn)方法
    9.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        9.1 Lgr5和PDCD5 不能影響彼此的表達(dá)
        9.2 Lgr5 可以抑制PDCD5 的核轉(zhuǎn)位
        9.3 Lgr5 可以競爭性結(jié)合PDCD5 進(jìn)而降低p53 的穩(wěn)定性
        9.4 Lgr5 通過PDCD5/p53 抑制阿霉素介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡
    10.討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻博期間發(fā)表的科研成果目錄
致謝



本文編號：3336893