目的:第三代EGFR-TKI在臨床試驗(yàn)中較一代、二代TKI顯示了更加驚喜的數(shù)據(jù),奧希替尼作為目前唯一獲批的三代TKI逐漸在臨床上得到廣泛認(rèn)可并順利贏得四大指南聯(lián)合推薦一線治療寶座。然而奧希替尼作為新一代的明星靶向藥物,終將面臨耐藥問題。明確耐藥機(jī)制,并探索耐藥后潛在的治療策略成為重要的研究方向。本課題擬通過體外誘導(dǎo)建立奧希替尼耐藥細(xì)胞株H1975/OR,利用二代測序技術(shù)找到可能導(dǎo)致奧希替尼獲得性耐藥的關(guān)鍵基因,探討奧希替尼獲得性耐藥的分子機(jī)制。以期為EGFR-TKI獲得性耐藥機(jī)制研究提供更多體外實(shí)驗(yàn)依據(jù),進(jìn)而為臨床耐藥后患者找到潛在性的治療策略。方法:對含有EGFR L858R/T790M雙突變的細(xì)胞系H1975進(jìn)行體外低濃度加量遞增方法誘導(dǎo)建立第三代EGFR-TKI奧希替尼耐藥株H1975/OR。經(jīng)過細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)檢測耐藥指數(shù)明確成功建立耐藥株后首先比較親本細(xì)胞與耐藥細(xì)胞在形態(tài)學(xué)及生物學(xué)特征方面的差異,包括利用CCK8、平板克隆形成明確兩株細(xì)胞增殖水平差異,利用流式分析儀檢測凋亡與細(xì)胞周期的差異,利用劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)明確兩株細(xì)胞遷移、侵襲能力的差異。由表型的差異考慮可能... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：141 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

孔板實(shí)驗(yàn)處理圖示

肺腺癌細(xì)胞系，分別觀察其對一代、三代 EGFR-TKI 藥物厄洛替尼、奧希替尼藥物敏感性差異。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn) PC9 對一代 TKI 厄洛替尼與三代 TKI 奧希替尼敏感性相差不多，但奧希替尼的 IC50較低即對奧希替尼敏感性更高（圖1.2.1A，表 1.2.1）；而 H1975 細(xì)胞系由于存在 T790M，一代 TKI 厄洛替尼不敏感，三代TKI 敏感（圖 1.2.1 B）。兩細(xì)胞系的對兩種藥物的 IC50 見表 1.2.1。根據(jù)結(jié)果表明 H1975 符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求。

1.2.3 奧希替尼耐藥株 H1975/OR 的鑒定及生物學(xué)特征分析1.2.3.1 奧希替尼耐藥株 H1975/OR 耐藥細(xì)胞株鑒定為確定耐藥細(xì)胞株是否成功建立，我們檢測親本和耐藥株在不同奧希替尼藥物濃度下 72 小時(shí)細(xì)胞存活情況，探討兩系細(xì)胞對奧希替尼的敏感性差異及耐藥指數(shù)。結(jié)果如圖 1.2.3.1 所示，隨著奧希替尼藥物濃度增加，兩種細(xì)胞存活逐漸減少。在相同藥物濃度作用下，耐藥細(xì)胞較親本細(xì)胞存活數(shù)多，測得兩系 IC50及耐藥指數(shù)如表1.2.3.1，親本細(xì)胞IC50為11.2nmol/L，耐藥株IC50為4.5umol/L，耐藥指數(shù)為 391.3。說明 H1975 奧希替尼耐藥株誘導(dǎo)成功。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
[1]Hedgehog信號(hào)通路在EGFR-TKI敏感和耐藥非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中的作用機(jī)制研究[D]. 白曉燕.南方醫(yī)科大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3336128