目的:肝細(xì)胞肝癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一。肝癌細(xì)胞在發(fā)生發(fā)展過程中與腫瘤微環(huán)境間存在著廣泛的信息和物質(zhì)交流。近幾年研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞能夠在發(fā)生、發(fā)展過程中向微環(huán)境釋放大量的直徑為30-150nm的微小囊泡,這種囊泡被稱為外泌體（exosome）。外泌體具有雙層膜結(jié)構(gòu),能夠穩(wěn)定地?cái)y帶蛋白質(zhì)、RNA等物質(zhì)參與腫瘤細(xì)胞間信息的傳遞。研究證實(shí),腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體能夠廣泛的參與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的改造、腫瘤細(xì)胞耐藥機(jī)制過程以及介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞間代謝偶聯(lián)的反應(yīng)。因此,外泌體在腫瘤細(xì)胞中的研究受到了諸多學(xué)者的關(guān)注。但目前關(guān)于腫瘤細(xì)胞外泌體釋放的過程尚未完全揭示,本研究聚焦于肝癌細(xì)胞內(nèi)外泌體釋放的分子機(jī)制研究。長鏈非編碼RNA（Long noncoding RNAs,lncRNAs）是一類長度超過200個(gè)核苷酸的非編碼RNA,通常不具備碼蛋白質(zhì)的功能。LncRNA在腫瘤形成中的調(diào)控作用越來越受到重視,但是在肝癌細(xì)胞中l(wèi)ncRNA對外泌體釋放過程的調(diào)控機(jī)制尚有待探索。近幾年研究發(fā)現(xiàn),HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA（HOTAIR）作為一種促癌基因能夠參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。我們在前期的研究證實(shí),HOT... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?Ａ．ＴＣＧＡ肝癌組織?

以空載質(zhì)粒ｐｃＤＮＡ３．１為對照組，利用外泌體提取試劑盒（ｅｘｏＥａｓｙ）分別??提取過表達(dá)ＨＯＴＡＩＲ肝癌細(xì)胞上清中的外泌體和對照組細(xì)胞上清中的外泌體。采??用透射電子顯微鏡觀察到上清提取中的外泌體形態(tài)（圖３Ａ）。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測提??取外泌體中表達(dá)外泌體標(biāo)志物ＣＤ６３和ＴｓｇｌＯｌ?（圖３Ｂ）。利用納米顆粒跟蹤技術(shù)分??析（Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ?ｔｒａｃｋｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ，ＮＴＡ）提取囊泡直徑峰度，，結(jié)果顯示我們所提取??的細(xì)胞外囊泡符合外泌體直徑范圍（圖３０。通過計(jì)算外泌體釋放囊泡數(shù)量，結(jié)??果顯示ＨＯＴＡＩＲ能夠顯著促進(jìn)肝癌細(xì)胞外泌體分泌（圖３Ｄ）。??１１??

圖１．?Ａ．＿Ｓ哀光＿系的，毫ＳＮＡＰ２３，?ＤＡＰＩ籃染的的是細(xì)胞核；Ｂ．綠色熒光Ｓ錄的是ＳＮＡＰ２３，??紅色毅光＆琦的是ＶＡＰＭ３的分布情況。??３．２?ＨＯＴＡＩＲ促進(jìn)ＳＮＡＰ２３磷酸化并激活ｍＴＯＲ通路??為進(jìn)一步探宄ＨＯＴＡＩＲ調(diào)控ＭＶＢ與細(xì)胞膜融合的分子機(jī)制，我們利用??Ｐｈｏｓ－ｔａｇ?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ磷酸化蛋＆凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測ＨＯＴＡＩＲ對ＳＮＡＰ２３磷酸化水??乎的影響。結(jié)果顯示，過表達(dá)ＨＯＴＡＩＲ能夠Ｍ著促進(jìn)了?ＳＮＡＰ２３磷酸化水平的??表達(dá)，Ｐ－ＳＮＡＰ２３／ＳＮＡＰ２３比例明顯增加（圖２ＡＬ有研究顯示，ＩｎｃＲＮＡＨＯＴＡＩＲ??３２??


本文編號：3296331