目的:肝細胞肝癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一。肝癌細胞在發(fā)生發(fā)展過程中與腫瘤微環(huán)境間存在著廣泛的信息和物質交流。近幾年研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細胞能夠在發(fā)生、發(fā)展過程中向微環(huán)境釋放大量的直徑為30-150nm的微小囊泡,這種囊泡被稱為外泌體（exosome）。外泌體具有雙層膜結構,能夠穩(wěn)定地攜帶蛋白質、RNA等物質參與腫瘤細胞間信息的傳遞。研究證實,腫瘤細胞分泌的外泌體能夠廣泛的參與腫瘤細胞轉移前微環(huán)境的改造、腫瘤細胞耐藥機制過程以及介導腫瘤細胞與基質細胞間代謝偶聯(lián)的反應。因此,外泌體在腫瘤細胞中的研究受到了諸多學者的關注。但目前關于腫瘤細胞外泌體釋放的過程尚未完全揭示,本研究聚焦于肝癌細胞內外泌體釋放的分子機制研究。長鏈非編碼RNA（Long noncoding RNAs,lncRNAs）是一類長度超過200個核苷酸的非編碼RNA,通常不具備碼蛋白質的功能。LncRNA在腫瘤形成中的調控作用越來越受到重視,但是在肝癌細胞中l(wèi)ncRNA對外泌體釋放過程的調控機制尚有待探索。近幾年研究發(fā)現(xiàn),HOX轉錄反義RNA（HOTAIR）作為一種促癌基因能夠參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。我們在前期的研究證實,HOT... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?Ａ．ＴＣＧＡ肝癌組織?

以空載質粒ｐｃＤＮＡ３．１為對照組，利用外泌體提取試劑盒（ｅｘｏＥａｓｙ）分別??提取過表達ＨＯＴＡＩＲ肝癌細胞上清中的外泌體和對照組細胞上清中的外泌體。采??用透射電子顯微鏡觀察到上清提取中的外泌體形態(tài)（圖３Ａ）。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測提??取外泌體中表達外泌體標志物ＣＤ６３和ＴｓｇｌＯｌ?（圖３Ｂ）。利用納米顆粒跟蹤技術分??析（Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ?ｔｒａｃｋｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ，ＮＴＡ）提取囊泡直徑峰度，，結果顯示我們所提取??的細胞外囊泡符合外泌體直徑范圍（圖３０。通過計算外泌體釋放囊泡數(shù)量，結??果顯示ＨＯＴＡＩＲ能夠顯著促進肝癌細胞外泌體分泌（圖３Ｄ）。??１１??

圖１．?Ａ．＿Ｓ哀光＿系的，毫ＳＮＡＰ２３，?ＤＡＰＩ籃染的的是細胞核；Ｂ．綠色熒光Ｓ錄的是ＳＮＡＰ２３，??紅色毅光＆琦的是ＶＡＰＭ３的分布情況。??３．２?ＨＯＴＡＩＲ促進ＳＮＡＰ２３磷酸化并激活ｍＴＯＲ通路??為進一步探宄ＨＯＴＡＩＲ調控ＭＶＢ與細胞膜融合的分子機制，我們利用??Ｐｈｏｓ－ｔａｇ?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ磷酸化蛋＆凝膠電泳實驗檢測ＨＯＴＡＩＲ對ＳＮＡＰ２３磷酸化水??乎的影響。結果顯示，過表達ＨＯＴＡＩＲ能夠Ｍ著促進了?ＳＮＡＰ２３磷酸化水平的??表達，Ｐ－ＳＮＡＰ２３／ＳＮＡＰ２３比例明顯增加（圖２ＡＬ有研究顯示，ＩｎｃＲＮＡＨＯＴＡＩＲ??３２??


本文編號：3296331