本文關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮特異性因子DLL4在腎細(xì)胞癌腫瘤生長，侵襲，血管生成及血行轉(zhuǎn)移中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：腎細(xì)胞癌是富血供腫瘤,其發(fā)生和進(jìn)展與腫瘤血管生成(angiogenesis)密切相關(guān)。目前研究表明大多數(shù)腎細(xì)胞癌出現(xiàn)抑癌基因VHL(Von-Hippel-Lindau)突變,該突變基因產(chǎn)生的蛋白失去了降解缺氧誘導(dǎo)因子HIF(Hypoxia Inducible Factor)的功能從而引起下游因子血管內(nèi)皮生長因子VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor)過度表達(dá)而導(dǎo)致腫瘤血管生成,從而促進(jìn)腫瘤快速生長和轉(zhuǎn)移。因此,目前轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌的一線治療藥物為阻斷VEGF信號通路的靶向治療。但是,靶向治療治療的總體有效率為30-50%,即相當(dāng)一部分腎細(xì)胞癌耐受抗VEGF治療,而且經(jīng)過靶向治療的腎細(xì)胞癌后期逐漸出現(xiàn)耐藥的情況。這些臨床現(xiàn)象提示,除了VEGF信號通路之外,尚有其他機(jī)制影響腫瘤血管生成。血管內(nèi)皮特異性因子DLL4被證實與血管生成密切相關(guān)且與VEGF信號通路既相關(guān)又獨(dú)立,除了VEGF之外,調(diào)節(jié)DLL4的其他機(jī)制研究較少。再者,DLL4除了影響腫瘤血管生成外,直接影響腎細(xì)胞癌的增殖及侵襲等生物學(xué)行為知之甚少�；诖颂岢黾僭O(shè)：DLL4可能通過影響內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成及腫瘤細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移而發(fā)揮雙重作用而影響腎細(xì)胞癌的血行轉(zhuǎn)移。本課題的研究目的：①研究DLL4對腫瘤血管生成的作用及相關(guān)機(jī)制；②研究DLL4對腎細(xì)胞癌的發(fā)生及侵襲等生物學(xué)行為的影響及下游信號通路;③研究DLL4對腎細(xì)胞癌血行轉(zhuǎn)移的影響及臨床意義。方法：①運(yùn)用real-time PCR,western blot及免疫組化技術(shù)檢測DLL4及相關(guān)基因在120例腎細(xì)胞癌組織及28例癌旁組織的信使RNA(mRNA)及蛋白表達(dá)水平,并運(yùn)用單因素及多因素模型分析這些基因表達(dá)量與標(biāo)本臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系;②通過流式細(xì)胞儀及增殖實驗MTS方法檢測DLL4對臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC及腎細(xì)胞癌細(xì)胞769-P、786-O、caki-1細(xì)胞增殖的影響,另外通過transwell方法檢測DLL4對HUVEC及上述腎細(xì)胞癌細(xì)胞株侵襲能力的影響;通過上述實驗明確DLL4對腫瘤細(xì)胞生長,侵襲及內(nèi)皮細(xì)胞血管生成的影響；③通過生物信息學(xué)預(yù)測的方法找出作用于DLL4的microRNAs,并通過熒光素酶實驗(luciferase assay)、western blot及功能學(xué)實驗驗證該miRNA是否能調(diào)控DLL4并且影響其功能；通過與高表達(dá)DLL4的細(xì)胞共培養(yǎng)及加入重組人DLL4蛋白(rDLL4)的方法調(diào)節(jié)DLL4水平后找出腫瘤細(xì)胞內(nèi)其下游靶基因,并通過在臨床標(biāo)本中表達(dá)相關(guān)性驗證它們是否有臨床意義：④對入組患者進(jìn)行隨訪,分析DLL4表達(dá)高低與腫瘤的血行轉(zhuǎn)移及靶向治療耐藥之間是否存在關(guān)聯(lián)。結(jié)果：①DLL4在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)高于癌旁組織,而且特異性表達(dá)于腫瘤血管內(nèi)皮；DLL4、微血管密度及DLL4表達(dá)密度(相對于血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量的表達(dá))在發(fā)生血行轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中的表達(dá)均高于淋巴轉(zhuǎn)移的腫瘤組織及非轉(zhuǎn)移腫瘤的組織的表達(dá),差異有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)：DLL4表達(dá)與血管密度均腫瘤分類相關(guān),在透明細(xì)胞癌中的表達(dá)高于乳頭狀細(xì)胞癌及嫌色細(xì)胞癌中的表達(dá),而DLL4表達(dá)密度與腫瘤分類無關(guān),而與腫瘤血管密度相關(guān);運(yùn)用logistic多因素分析模型發(fā)現(xiàn)腫瘤的血行轉(zhuǎn)移不僅與腫瘤大小及微血管密度有關(guān),而且與DLL4表達(dá)密度相關(guān)(p0.05)。②在內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC中過表達(dá)DLL4后其細(xì)胞增殖及侵襲能力均增加,而共培養(yǎng)高表達(dá)DLL4的細(xì)胞或添加rDLL4后,腎細(xì)胞癌細(xì)胞株769-P、786-O和caki-1田胞增殖及侵襲能力也增強(qiáng)；DLL4通過影響腫瘤細(xì)胞周期而影響細(xì)胞增殖能力。③生物信息學(xué)預(yù)測DLL4為miR-30a的靶基因,通過熒光素酶實驗及功能實驗驗證發(fā)現(xiàn)miR-30a通過作用于mRNA 3'UTR下調(diào)DLL4的表達(dá)并影響其對血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC的作用;共培養(yǎng)高表達(dá)DLL4的細(xì)胞或添加rDLL4后,Notch信號通路被激活,通過下游靶因子Heyl促進(jìn)MMP9的表達(dá),從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。④經(jīng)過4年的隨訪發(fā)現(xiàn)miR-30a及DLL4的表達(dá)密度高低與腫瘤術(shù)后發(fā)生血行轉(zhuǎn)移相關(guān),而且DLL4表達(dá)密度高的腫瘤對抗VEGF靶向治療更加敏感。結(jié)論：①血管特異性蛋白DLL4促進(jìn)腎細(xì)胞癌生長、侵襲及血管生成而促進(jìn)腫瘤的血行轉(zhuǎn)移。②機(jī)制研究表明DLL4通過激活腎細(xì)胞癌腫瘤細(xì)胞Notch/Hey1/MMP9信號通路而發(fā)揮作用。③腎透明細(xì)胞癌中低表達(dá)的miR-30a通過上調(diào)靶基因DLL4而促進(jìn)腫瘤血管生成,并最終影響腎細(xì)胞癌血行轉(zhuǎn)移。④DLL4的表達(dá)與靶向藥物治療效果相關(guān),抑制DLL4/Notch/Heyl/MMP9信號通路可能成為新的治療靶點,聯(lián)合抗VEGF靶向藥物可能提高治療效果。
【關(guān)鍵詞】：腎腫瘤 腫瘤轉(zhuǎn)移 血管生成 信號傳導(dǎo) 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-15
• 第一部分DLL4在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)水平及部位15-26
• 1. 材料與方法15-23
• 2. 結(jié)果23-25
• 2.1 120例腎細(xì)胞癌腫瘤組織的臨床病例特點23
• 2.2 DLL4在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)部位23-24
• 2.3 DLL4/Notch信號通路在腎細(xì)胞癌組織及細(xì)胞株中的表達(dá)24-25
• 3. 小結(jié)25-26
• 第二部分 DLL4與腎細(xì)胞癌血行轉(zhuǎn)移的關(guān)系26-32
• 1. 材料與方法26-27
• 2. 結(jié)果27-31
• 2.1 DLL4的表達(dá)與腫瘤病理特點的關(guān)系27-29
• 2.2 DLL4對腎細(xì)胞癌血行轉(zhuǎn)移及靶向治療有效性的預(yù)測作用29-31
• 3. 小結(jié)31-32
• 第三部分 DLL4與腎細(xì)胞癌腫瘤生長的關(guān)系32-39
• 1. 材料與方法32-34
• 2. 結(jié)果34-38
• 2.1 DLL4及血管密度在腎細(xì)胞癌生長過程中的臨床意義34-35
• 2.2 DLL4/Notch信號通路促進(jìn)腎細(xì)胞癌腫瘤細(xì)胞增殖35-36
• 2.3 DLL4/Notch信號通路與腎細(xì)胞癌腫瘤細(xì)胞周期的關(guān)系36-38
• 3. 小結(jié)38-39
• 第四部分 DLL4與丯細(xì)胞癌腫瘤細(xì)胞侵襲能力的關(guān)系39-46
• 1. 材料與方法39-40
• 2. 結(jié)果40-45
• 2.1 DLL4促進(jìn)腎細(xì)胞癌腫瘤細(xì)胞侵襲40-41
• 2.2 DLL4下游信號通路41-45
• 2.2.1 DLL4促進(jìn)腎細(xì)胞癌分泌MMP941-43
• 2.2.2 Notch信號通路下游因子Heyl介導(dǎo)DLL4的功能43-45
• 3. 小結(jié)45-46
• 第五部分 miR-30a調(diào)控DLL4并影響腎細(xì)胞癌血管生成46-57
• 1. 材料與方法46-47
• 2. 結(jié)果47-56
• 2.1 miR-30a調(diào)控DLL4并影響內(nèi)皮細(xì)胞增殖及侵襲能力47-50
• 2.2 miR-30a及DLL4與腎細(xì)胞癌血管密度的關(guān)系50-53
• 2.3 miR-30a與腎細(xì)胞癌血行轉(zhuǎn)移的關(guān)系53-56
• 3. 小結(jié)56-57
• 討論及結(jié)論57-60
• 參考文獻(xiàn)60-68
• 綜述68-77
• 參考文獻(xiàn)74-77
• 英文縮略詞表77-79
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文79-80
• 致謝80

  本文關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮特異性因子DLL4在腎細(xì)胞癌腫瘤生長，，侵襲，血管生成及血行轉(zhuǎn)移中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：290580