本文關(guān)鍵詞：攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃癌化療效果的影響及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:胃癌是嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤,作為胃癌主要治療手段的化療其耐藥問題日益嚴(yán)重,缺氧是造成胃癌化療耐藥的重要原因。本課題利用間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃癌的靶向趨化性,構(gòu)建表達(dá)血紅蛋白的間充質(zhì)干細(xì)胞,使其充分?jǐn)y氧后作用于缺氧的胃癌細(xì)胞,給予臨床比較常用的胃癌化療藥物,觀察攜氧后的間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃癌化療效果的影響,并從分子水平探討其影響胃癌化療效果可能的機(jī)制,以確定這種靶向治療方法的可行性方法:貼壁法培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞及胃癌細(xì)胞株MKN-45及SGC-7901,流式細(xì)胞術(shù)鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志,利用慢病毒感染使血紅蛋白基因表達(dá)于間充質(zhì)干細(xì)胞并測(cè)序驗(yàn)證,篩選出穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株后,利用IPTG和血紅素誘導(dǎo)血紅蛋白的表達(dá),western blotting法檢測(cè)蛋白表達(dá)情況。Transwell法檢測(cè)表達(dá)血紅蛋白的間充質(zhì)干細(xì)胞是否具有向胃癌細(xì)胞株MKN-45及SGC-7901遷移的能力。將此MSC-hemo置于適宜的氧環(huán)境中使其充分?jǐn)y氧后研究其對(duì)胃癌細(xì)胞化療的影響。分別檢測(cè)攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶(5-FU)及順鉑(CDDP)殺傷胃癌細(xì)胞功能的影響。設(shè)空白對(duì)照組、單純化療藥物組及攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合化療組,利用MTT法分別檢測(cè)各組胃癌細(xì)胞的活性,流式細(xì)胞術(shù)對(duì)干預(yù)前后細(xì)胞的凋亡情況進(jìn)行檢測(cè)。Trizol法提取干預(yù)前后兩株胃癌細(xì)胞RNA后,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)干預(yù)前后胃癌細(xì)胞中HIF-1α、MDR1及VEGF基因表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)分析,應(yīng)用SPASS17.0軟件統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各組之間差異,當(dāng)p0.05時(shí)認(rèn)為有顯著性差異。結(jié)果:培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞及胃癌細(xì)胞均符合其標(biāo)準(zhǔn)生物學(xué)特點(diǎn)。測(cè)序結(jié)果顯示表達(dá)于間充質(zhì)干細(xì)胞中的血紅蛋白基因序列符合Gene bank中HBA2及HBB基因序列。病毒轉(zhuǎn)染率達(dá)到80%,感染復(fù)數(shù)(MOI)為10。經(jīng)IPTG及血紅素誘導(dǎo)后,Western blotting能夠檢測(cè)到血紅蛋白的表達(dá)。Transwell結(jié)果顯示與普通的間充質(zhì)干細(xì)胞一樣,表達(dá)血紅蛋白的間充質(zhì)干細(xì)胞也具備向胃癌細(xì)胞遷移的能力。MTT實(shí)驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示與單純的化療相比,攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合化療組對(duì)各株胃癌細(xì)胞的抑制率更高,凋亡檢測(cè)結(jié)果也顯示攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)組具有更高的凋亡率。對(duì)各組HIF-1α、MDR1及VEGF基因表達(dá)的定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明:不論是對(duì)于MKN-45細(xì)胞株還是SGC-7901細(xì)胞組,與未加任何干預(yù)的細(xì)胞相比,攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)組細(xì)胞中HIF-1α、MDR1及VEGF均表現(xiàn)出明顯的下降趨勢(shì)。結(jié)論:我們的結(jié)果表明攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞能夠明顯增強(qiáng)胃癌的化療效果,利用間充質(zhì)干細(xì)胞作為一種攜氧工具為實(shí)體瘤補(bǔ)氧是一種新奇的改善腫瘤局部缺氧環(huán)境的方法,能夠改善胃癌化療治療的效果。進(jìn)一步研究表明此作用的靶點(diǎn)是HIF-1α基因,進(jìn)而影響了其下游相關(guān)基因MDR1、VEGF的表達(dá)從而影響胃癌的化療效果。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 胃癌 缺氧 化療 機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 縮略語(yǔ)表9-12
• 第一章 引言12-21
• 1.1 胃癌化療耐藥12-14
• 1.2 腫瘤缺氧14-15
• 1.3 腫瘤缺氧與化療耐藥15-17
• 1.4 目前改善腫瘤缺氧的方法17
• 1.5 間充質(zhì)干細(xì)胞靶向治療17-19
• 1.6 本課題選題思路及研究?jī)?nèi)容19-21
• 第二章 攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃癌化療效果的影響21-41
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法21-30
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法22-30
• 2.2 主要儀器設(shè)備30
• 2.3 結(jié)果30-38
• 2.3.1 間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)及表型鑒定30-32
• 2.3.2 胃癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察32
• 2.3.3 表達(dá)血紅蛋白的載體構(gòu)建情況32-34
• 2.3.4 間充質(zhì)干細(xì)胞浸染實(shí)驗(yàn)結(jié)果34
• 2.3.5 Western blotting檢測(cè)MSC-hemo細(xì)胞中血紅蛋白表達(dá)情況34-35
• 2.3.6 間充質(zhì)干細(xì)胞體外向胃癌細(xì)胞遷移能力35-37
• 2.3.7 攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃癌化療效果的影響37
• 2.3.8 攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)后胃癌細(xì)胞化療凋亡情況37-38
• 2.4 討論38-41
• 第三章 攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞影響胃癌化療效果的機(jī)制41-51
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法41-43
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料41
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法41-43
• 3.2 主要儀器設(shè)備43-44
• 3.3 結(jié)果44-47
• 3.3.1 攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)對(duì)胃癌細(xì)胞HIF-1a 基因表達(dá)的影響44-45
• 3.3.2 攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)對(duì)胃癌細(xì)胞MDR1基因表達(dá)的影響45-46
• 3.3.3 攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)對(duì)胃癌細(xì)胞VEGF基因表達(dá)的影響46-47
• 3.4 討論47-51
• 第四章 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 文獻(xiàn)綜述 MSC: A new vehicle for gastric cancer targeted gene therapy59-78
• 參考文獻(xiàn)72-78
• 在學(xué)期間的研究成果78-79
• 致謝79

  本文關(guān)鍵詞：攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃癌化療效果的影響及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：277737