研究背景在法醫(yī)學(xué)現(xiàn)場(chǎng)勘查中,對(duì)不同體液的正確收集和識(shí)別往往能暴露案件的性質(zhì),并有利于案件現(xiàn)場(chǎng)重建。目前已有的體液來(lái)源鑒定方法有:化學(xué)試驗(yàn)、免疫學(xué)試驗(yàn),蛋白質(zhì)催化活性試驗(yàn),光譜學(xué)方法和顯微觀察。這些常規(guī)體液鑒定方法大多只能初篩而不能認(rèn)定,存在低敏感度、特異性及易受腐敗等因素影響的缺陷。近年來(lái),基于分子遺傳學(xué)的核酸分析方法,如體液特異性信使RNA（messenger RNA,mRNAs）、組織特異性差異性甲基化區(qū)域（tissue-specific differentially methylated regions,tDMRs）、microRNAs（miRNAs）的檢測(cè)逐漸發(fā)展,取代傳統(tǒng)的體液識(shí)別方法。其中,miRNA作為一類短（18-25nt）、內(nèi)源性非編碼的RNA小分子,已被證實(shí)在不同體液中的表達(dá)存在差異。因其序列短小,能耐受腐敗降解影響,已有研究證實(shí)mi RNA能在唾液和血液斑跡中穩(wěn)定存在,實(shí)驗(yàn)室條件下保存1年仍可穩(wěn)定檢出。MiRNA的這些特點(diǎn)使其可以作為法醫(yī)學(xué)體液來(lái)源鑒定新的分子工具,其表達(dá)譜逐漸成為體液識(shí)別（如尿液、靜脈血、月經(jīng)血、羊水、精液、陰道分泌物等）的潛在實(shí)用平臺(tái)。但是,m... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

（A）當(dāng)靶物質(zhì)存在時(shí)，與3-WJ探針形成3-WJ結(jié)構(gòu)；（B）無(wú)靶物質(zhì)存在時(shí)，不能形成3-WJ結(jié)構(gòu)

圖 1.2 基于聚合剪切酶介導(dǎo)的等溫指數(shù)擴(kuò)增反應(yīng)檢測(cè) miRNA 的電化學(xué)傳感器原理圖Figure 1.2 Exponential amplification reaction for miRNA electrochemical detection based ontarget-triggered three-way junction (3-WJ), with a “positive feedback” region in 3-WJtemplate.3.2 所設(shè)計(jì)的電化學(xué)傳感器的可行性驗(yàn)證為了驗(yàn)證上述傳感器用于miRNA定量檢測(cè)及模板鏈中“正反饋”區(qū)域?qū)崿F(xiàn)雙重放大的可行性，采用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行分析（如圖 1.3A）。與相同濃度但單獨(dú)存在的靶 miRNA、3-WJ 探針泳道相比，當(dāng)模板鏈、引物鏈及 miRNA 共同存在時(shí)，產(chǎn)生了一條弱遷移率的明亮條帶，證明靶 miRNA 觸發(fā)了 3-WJ 結(jié)構(gòu)的形成[63]。3-WJ 結(jié)構(gòu)形成后，在 KF 聚合酶、Nb.BbvCI 限制性內(nèi)切酶及 dNTPs 的作用下，37℃孵育 60 min 后，產(chǎn)生了一條 ＜ 20 bp 的新條帶，這條新條帶便是聚合剪切反應(yīng)產(chǎn)生的信號(hào)鏈。此外，模板鏈中含“正反饋”區(qū)域 3-WJ 結(jié)構(gòu)的與模板鏈

ation obtained from three independent experiments.KF 聚合酶及 Nb.BbvCI 限制性內(nèi)切酶的濃度對(duì)聚合剪切放大反應(yīng)的影響如圖1.5 A,B 所示，DPV 響應(yīng)信號(hào)值隨著 KF 酶濃度的增大呈上升趨勢(shì)，當(dāng) KF 聚合酶濃度超過 0.18 U μL-1時(shí)，DPV 響應(yīng)信號(hào)值趨于平臺(tái)；同樣，隨著 Nb.BbvCI 限制性內(nèi)切酶濃度的增大，DPV 響應(yīng)信號(hào)值也呈上升趨勢(shì)，當(dāng) Nb.BbvCI 限制性內(nèi)切酶濃度增至 0.4 U μL-1時(shí)，DPV 信號(hào)值達(dá)到最大。因此

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]RNA在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用及研究進(jìn)展[J]. 高林林,李佑英,嚴(yán)江偉,劉雅誠(chéng).  法醫(yī)學(xué)雜志. 2011(06)



本文編號(hào)：3114344