目的:1)探討氧化鐵納米粒子（iron oxide nanoparticles,IONPs）促人牙周膜干細胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）成骨分化的作用及選擇最佳IONPs成骨濃度,并通過轉錄組測序分析其所發(fā)揮作用的可能分子機制。2)觀察氧化鐵納米粒子在大鼠牙周骨缺損修復中的應用效果。方法:1)（1）通過改良酶消化法及有限稀釋法克隆化獲得hPDLSCs,并應用流式技術檢測第三代hPDLSCs表型。（2）體外定向三系分化培養(yǎng)hPDLSCs 21天后,分別探討其成骨、成脂、成軟骨分化的潛能。（3）佩爾藍染色、透射電鏡（TEM）觀察IONPs在hPDLSCs的分布。（4）免疫熒光法檢測IONPs處理hPDLSCs后表型;（5）CCK-8法、EdU免疫熒光檢測不同濃度0μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、300μg/ml、500μg/mlIONPs處理hPDLSCs后細胞的增殖。（6）以0μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、300μg/ml、500... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數】：80 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

人牙周膜干細胞形態(tài)學觀察（40×）

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文沈夢杰292.2有限稀釋法克隆純化hPDLSCs接種于96孔板24h后挑選標記單個貼壁細胞（圖2A/B）；3-5天后單個hPDLSCs克隆成簇的細胞集落（圖2C）；單個細胞長滿底孔板的2/3時重懸后貼壁，細胞大小均勻，胞漿飽滿（圖2D）。有限稀釋法單克隆培養(yǎng)的單個hPDLSCs呈短梭形或多角形，貼壁、快速生長。圖2有限稀釋法純化人牙周膜干細胞（A:100×;B/C/D:40×）注：A：單個人牙周膜干細胞（2天）；B：5天后克隆成簇的人牙周膜干細胞；C/D:一代人牙周膜干細胞（10天）Fig.2MorphologicalcharacteristicofhAMSCs.（A:100×;B/C/D:40×）Note:A:AsinglehPDLSCs(2days);B:hPDLSCs（5days）C/D:P1generationofhPDLSCs(10days).

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文沈夢杰302.3hPDLSCs鑒定及純度分析hPDLSCs進行流式技術檢測，鑒定細胞表型，結果證實：CD44、CD73、CD90、CD105高表達，表達率99%以上，CD34、CD11B、CD19、CD45、HLA-DR陰性表達，從而提示hPDLSCs屬于MSCs，確定了本實驗所用細胞的來源及其特征（圖3）。圖3流式細胞術檢測第3代hPDLSCs表型分子及純度注：A:CD19+CD34+CD45+CD11b+HLA-DR;B:CD44;C:CD73;D:CD105;E:CD90Fig.3DetectionofphenotypicmoleculesandpurityofthethirdgenerationofhPDLSCsbyflowcytometry.Note:A:CD19+CD34+CD45+CD11b+HLA-DR;B:CD44;C:CD73;D:CD105;E:CD90

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3330951