目的:肺發(fā)育需要在正確時間地點微血管以合適數(shù)量出現(xiàn)。血管發(fā)育破壞從而擾亂肺泡上皮和毛細(xì)血管之間的關(guān)系是BPD發(fā)病重要機制。高氧環(huán)境下,Grx1/PSSG氧化還原模塊調(diào)控信號通路,介導(dǎo)肺微血管發(fā)育。但Grx1/PSSG作用方式、功能及與BPD發(fā)生的相互關(guān)系尚未完全闡明。我們推測BPD氧化狀態(tài)下Grx1/PSSG通過氧化還原NF-kB和HIF-1α通路調(diào)節(jié)炎性因子及VEGF之間平衡進(jìn)而影響肺血管發(fā)育,引起B(yǎng)PD病理改變,肺泡間隔擴大。我們擬利用小鼠BPD模型探討B(tài)PD發(fā)生始動因素:肺微血管發(fā)育紊亂-炎癥介質(zhì)誘導(dǎo)而非VEGF介導(dǎo)引起生理肺微血管發(fā)育阻滯而病理性血管形成。進(jìn)一步明確BPD發(fā)生中肺微血管形成紊亂機制,并試圖通過干預(yù)Grx1信號通路治療BPD。力爭在BPD發(fā)病機制血管假說方面獲得突破,引導(dǎo)生理性毛細(xì)血管形成。方法:實驗分組:取新生1天的C57BL/6J小鼠隨機分為Grx1^-/--control組、WT-control組、Grx1^-/--O2組和WT-O2組,每組各50只。本實驗采用的是85%高氧模型造模方法,取各組新生小鼠生后1、3、7、... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

高氧對小鼠Grx1酶活性（A）、蛋白表達(dá)（B）和免疫熒光（C）強度的影響

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文22由于高氧增加了BPD肺組織中的Grx1含量，因此我們接下來研究了Grx1消融對BPD表型的影響。我們記錄了每組21天的死亡率，幼鼠的生存曲線如圖2A所示。高氧暴露會降低存活率，但是Grx1消融在高氧暴露后逆轉(zhuǎn)了這種存活率趨勢。高氧組的病理特征與肺泡簡化一致，這是BPD的典型特征。Grx1缺陷型小鼠的肺泡發(fā)育得到改善，即使是那些用85％的氧氣治療的小鼠（圖2B）。RAC用于評估肺泡的數(shù)量，并根據(jù)MLI測量值計算肺泡大校與對照肺相比，暴露于85％O2的肺中的RAC值顯著降低；但是，暴露于85％O2的肺中的MLI值顯著高于對照肺。Grx1消融明顯防止了高氧氣暴露引起的病理損傷（圖2C）。圖2各組小鼠死亡率（A）、肺組織形態(tài)學(xué)（B）、MLI和RAC（C）的比較Fig.2EffectofGrx1onsurvivalandlungmorphology.(A)Kaplan-Meiercurvesofmiceinfourgroups.(B)Hematoxylinandeosinstainingoflungtissuesat21days.(C)EffectsofGrx1duringhyperoxiaonRACandMLIinmice.2.3Grx1缺失誘導(dǎo)VEGFR2和VEGFA表達(dá)增加由于各種血管生成基因?qū)τ诋a(chǎn)后肺血管生成必不可少，因此我們接下來關(guān)注2.2Grx1消融增強BPD小鼠的存活和肺泡形成

調(diào)節(jié) 依賴性信號通路的能力，以證實 缺乏癥通過 軸改善了 BPD。 Western 印跡顯示，暴露于 O2 的小鼠中 VEGFR2 和 VEGFA 的水平均顯著降低，而通過 Grx1 消融，二者的水平均升高（圖 3A）。通過免疫熒光獲得高倍放大的共聚焦圖像，以專門評估 VEGFR2 和 CD31 的共定位。在新生兒對照小鼠中，VEGFR2 與 CD31 的共定位發(fā)生在上皮細(xì)胞中（由復(fù)合圖像上主要的黃色/橙色信號證明），該細(xì)胞位于次級棘的尖端。在暴露于 O2 的小鼠中，VEGFR2 和 CD31 的染色均明顯減少，位于隔膜尖端的上皮細(xì)胞中不存在 VEGFR2表達(dá)，而在 Grx1 消融后，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中的 VEGFR2 表達(dá)增加（圖 3C）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高氧及TGF-β1對肺泡Ⅱ型細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響[J]. 劉芳君,鄧春,郭春寶,符州.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2012(05)



本文編號：3327308