本文關(guān)鍵詞：胃癌細(xì)胞白藜蘆醇敏感性與STAT3信號(hào)通路關(guān)系的初探，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景胃癌是世界上第四大常見(jiàn)的癌癥,其致死率在腫瘤中高居第二。目前臨床上5-FU、順鉑、紫杉醇、奧沙利鉑和草酸鉑為常用的化療藥物,但是這些藥物或多或少都會(huì)給病人帶來(lái)毒副作用。因此尋找無(wú)毒副作用又具有療效的藥物具有非常重要的臨床意義。白藜蘆醇廣泛存在于虎杖、葡萄等70多種天然植物中。白藜蘆醇具有多種生物學(xué)功能,包括抗炎、抗氧化、抗腫瘤和神經(jīng)保護(hù)等,而且對(duì)人和動(dòng)物無(wú)毒副作用。所以白藜蘆醇對(duì)胃癌的預(yù)防和治療具有很好地前景。大量研究表明,白藜蘆醇可能是通過(guò)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路(如Wnt、Notch或JAK/STAT信號(hào)通路等)的抑制或激活來(lái)控制細(xì)胞的增殖或凋亡。也有文獻(xiàn)報(bào)道,STAT3不僅在膀胱癌、乳腺癌、胰腺癌和宮頸癌,還在胃癌中異�；罨捅磉_(dá)升高。但是有關(guān)白藜蘆醇對(duì)胃癌的影響及其與STAT3信號(hào)通路的關(guān)系研究尚少。目的(1)研究胃癌細(xì)胞系MGC-803、BGC-823和AGS對(duì)白藜蘆醇的敏感性及其作用特點(diǎn)。(2)研究分析100μM白藜蘆醇處理胃癌細(xì)胞系MGC-803、BGC-823和AGS 48h前后,STAT3、p-STAT3以及該信號(hào)通路中STAT3負(fù)向調(diào)控因子SOCS3、p-SHP2和PIAS3的表達(dá)情況,并分析可能的作用機(jī)制。(3)分析JAK特異性抑制劑AG490作用于MGC-803、BGC-823和AGS細(xì)胞48h前后,胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡情況,從而探討在胃癌細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中STAT信號(hào)通路所起的作用和白藜蘆醇的抗腫瘤活性與該信號(hào)通路可能存在的內(nèi)在聯(lián)系。方法(1)胃癌細(xì)胞MGC-803、BGC-823在含有10%國(guó)產(chǎn)優(yōu)級(jí)胎牛血清的L-DMEM中進(jìn)行培養(yǎng),用100μΜ白藜蘆醇處理48h后收取細(xì)胞和爬片進(jìn)行保存;ags細(xì)胞采用含有10%進(jìn)口fbs的s,/f12培養(yǎng)液中培養(yǎng),用100μΜ白藜蘆醇處理48h后收取細(xì)胞和爬片進(jìn)行保存。(2)對(duì)細(xì)胞爬片進(jìn)行he染色,觀察100μΜ白藜蘆醇和80μΜag490處理后細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)上的變化。(3)運(yùn)用mtt法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況。(4)運(yùn)用fcm(流式細(xì)胞術(shù))方法檢測(cè)白藜蘆醇和ag490處理細(xì)胞后細(xì)胞周期和凋亡情況。(5)應(yīng)用icc(免疫細(xì)胞化學(xué))、rt-pcr和westernblotting等方法檢測(cè)在用白藜蘆醇處理48h后jak/stat信號(hào)通路中stat3、p-stat3以及stat3的負(fù)向調(diào)控因子socs3、p-shp2和pias3的表達(dá)水平的改變。(6)運(yùn)用icc的方法檢測(cè)ag490處理48h后三個(gè)細(xì)胞系中p-stat3表達(dá)情況。結(jié)果(1)he染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞系mgc-803、bgc-823和ags在100μΜ白藜蘆醇處理48h后細(xì)胞形態(tài)都發(fā)生明顯變化;抑制mgc-803的生長(zhǎng),有少量細(xì)胞凋亡,抑制bgc-823和ags的生長(zhǎng),同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;同時(shí)ags細(xì)胞胞質(zhì)縮小,有個(gè)別細(xì)胞融合成大細(xì)胞現(xiàn)象。在80μΜag490處理48h前后,胃癌細(xì)胞系mgc-803、bgc-823和ags的形態(tài)發(fā)生變化,數(shù)量減少。(2)mtt結(jié)果顯示白藜蘆醇濃度梯度處理胃癌細(xì)胞系mgc-803、bgc-823和ags48h后,細(xì)胞的增殖與活性與白藜蘆醇濃度呈負(fù)相關(guān),其中bgc-823和ags更為敏感。(3)fcm檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在100μΜ白藜蘆醇處理胃癌細(xì)胞系mgc-803、bgc-823和ags48h前后,細(xì)胞周期被阻滯在g1期,且三個(gè)細(xì)胞系均有不同程度的細(xì)胞凋亡,而且bgc-823和ags凋亡率高于mgc-803;在80μΜag490處理胃癌細(xì)胞系mgc-803和bgc-82348h前后,細(xì)胞周期被阻滯在g1期,且有不同程度的生長(zhǎng)抑制;在80μΜag490處理胃癌細(xì)胞系ags48h前后,細(xì)胞周期被阻滯在s期,且有一定的生長(zhǎng)抑制�？偟膩�(lái)說(shuō),胃癌細(xì)胞系mgc-803、bgc-823和ags對(duì)白藜蘆醇和ag490都具有一定的敏感性:其中mgc-803對(duì)白藜蘆醇欠敏感,bgc-823和ags對(duì)白藜蘆醇較敏感;mgc-803、bgc-823和ags對(duì)ag490均較敏感。(4)icc結(jié)果顯示在100μΜ白藜蘆醇處理48h后,在胃癌細(xì)胞系mgc-803中STAT3表達(dá)略微下調(diào),而p-STAT3表達(dá)沒(méi)有明顯變化,SOCS3表達(dá)上調(diào)、PIAS3表達(dá)下調(diào),p-SHP2無(wú)明顯變化;在BGC-823中,STAT3和p-STAT3均表達(dá)下調(diào),負(fù)向調(diào)控因子p-SHP2和PIAS3均表達(dá)上調(diào),而SOCS3無(wú)明顯變化。AGS細(xì)胞系中,除了SOCS3表達(dá)下調(diào)以外其他均沒(méi)有明顯變化。(5)Western blotting結(jié)果顯示在100μΜ白藜蘆醇處理48h后,在胃癌細(xì)胞系MGC-803中STAT3表達(dá)略微下調(diào)、p-STAT3和p-SHP2無(wú)明顯變化。在AGS中STAT3和p-STAT3均沒(méi)有明顯變化,而p-SHP2表達(dá)略微下調(diào);在BGC-823中STAT3和p-STAT3均表達(dá)下調(diào),負(fù)調(diào)控因子p-SHP2無(wú)明顯變化。(6)RT-PCR結(jié)果顯示100μΜ白藜蘆醇處理胃癌細(xì)胞系MGC-803、BGC-823和AGS 48h后,MGC-803和BGC-823中STAT3表達(dá)下調(diào),AGS中STAT3略微下調(diào);在MGC-803中負(fù)調(diào)控因子SHP2無(wú)明顯變化、SOCS3有所上升,而PIAS3表達(dá)下調(diào);在BGC-823中負(fù)調(diào)控因子SHP2和PIAS3表達(dá)明顯上升,SOCS3無(wú)明顯變化;在AGS中負(fù)向調(diào)控因子SHP2和PIAS3均無(wú)明顯變化,而SOCS3表達(dá)下調(diào)。結(jié)論(1)白藜蘆醇能夠抑制胃癌細(xì)胞系MGC-803、BGC-823和AGS細(xì)胞的生長(zhǎng)、并促進(jìn)BGC-823和AGS細(xì)胞凋亡,細(xì)胞被阻滯在G1期。(2)BGC-823和MGC-803細(xì)胞系對(duì)RES敏感性差異可能與STAT3信號(hào)通路的抑制程度有關(guān)。(3)白藜蘆醇、AG490處理BGC-823細(xì)胞后細(xì)胞凋亡程度不同,提示白藜蘆醇可能存在多靶點(diǎn)。(4)AG490通過(guò)抑制STAT3的活化下調(diào)p-STAT3的水平進(jìn)而抑制胃癌細(xì)胞系MGC-803、BGC-823和AGS的生長(zhǎng)。(5)不同的胃癌細(xì)胞系對(duì)白藜蘆醇的敏感性與STAT3通路的活化狀態(tài)不完全一致,提示白藜蘆醇對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和凋亡可能存在多細(xì)胞信號(hào)通路的協(xié)同作用,以及對(duì)胃癌進(jìn)行個(gè)體化治療具有必要性。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 白藜蘆醇 STAT信號(hào)通路 AG490
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 一 材料與方法15-18
• 二 實(shí)驗(yàn)方法18-26
• 結(jié)果26-41
• 討論41-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 綜述50-62
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 致謝62-63

【相似文獻(xiàn)】

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3 王曉強(qiáng);STAT3信號(hào)通路在鼻息肉發(fā)病機(jī)制中作用的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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8 王s

本文編號(hào)：328819