目的:檢測剪接因子3B亞單位1（SF3B1）在不同分型乳腺癌中的表達量,評估其表達與臨床病理學因素間的相關性。同時在體外檢測SF3B1敲除后對雌激素受體（ER）陽性乳腺癌細胞增殖、侵襲、遷移、細胞周期和凋亡的影響。方法:用免疫組化檢測110例乳腺癌標本中SF3B1的表達,通過ROC曲線確定最佳切點值,將乳腺癌患者組織標本分為高表達組與低表達組,并與臨床病理因素相關聯(lián);通過短發(fā)夾RNA（shRNA）轉染ER陽性乳腺癌細胞ZR-75-30進行SF3B1敲除,將其分為敲除組（SF3B1-sh1,SF3B1-sh2組）和陰性對照組（ZR-75-30-NC組）;用實時熒光定量的反轉錄聚合酶鏈式反應（RT-qPCR）和蛋白質(zhì)印跡（Western blot）檢測分別在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平驗證SF3B1基因的敲除效率;用MTT法和集落形成實驗評估細胞增殖能力;使用Transwell法測定細胞侵襲和遷移的能力;流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡;應用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計,計量資料采用均數(shù)±標準差（Mean±SD）表示,組間比較采用t檢驗,多組間比較采用單因素方差分析,P<0.05差異具... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

與鄰近的正常乳腺組織相比，SF3B1在乳腺癌組織中表達上調(diào)

山西醫(yī)科大學碩士學位論文16圖2.SF3B1在不同乳腺癌細胞中的表達及敲除效率的驗證。(a)RT-qPCR檢測6株乳腺癌細胞系中SF3B1的mRNA表達量。(b)RT-qPCR檢測ZR-75-30細胞系中SF3B1的敲除效率。(c)Westernblot檢測ZR-75-30細胞系中SF3B1的敲除效率。注：SF3B1：剪接因子3B亞單位1；敲除組（SF3B1-sh1,SF3B1-sh2組）和陰性對照組（ZR-75-30-NC組）如集落形成實驗所示，敲除組集落形成效率顯著降低(P<0.01)(圖3a)。然后用MTT法分析SF3B1基因敲除與細胞增殖的關系。分別于24、48、72、96、120h測定吸光度值。在72、96、120h，ZR-75-30細胞系中，SF3B1敲除組吸光度值與相應的陰性對照組相比明顯降低(P<0.05)(圖3b)。圖3.SF3B1敲除在體外抑制ZR-75-30細胞增殖和集落形成。(a)與陰性對照組相比，SF3B1敲除組集落形成數(shù)減少(P<0.01)。(b)SF3B1敲除抑制ZR-75-30細胞的增殖(P<0.05)。

山西醫(yī)科大學碩士學位論文16圖2.SF3B1在不同乳腺癌細胞中的表達及敲除效率的驗證。(a)RT-qPCR檢測6株乳腺癌細胞系中SF3B1的mRNA表達量。(b)RT-qPCR檢測ZR-75-30細胞系中SF3B1的敲除效率。(c)Westernblot檢測ZR-75-30細胞系中SF3B1的敲除效率。注：SF3B1：剪接因子3B亞單位1；敲除組（SF3B1-sh1,SF3B1-sh2組）和陰性對照組（ZR-75-30-NC組）如集落形成實驗所示，敲除組集落形成效率顯著降低(P<0.01)(圖3a)。然后用MTT法分析SF3B1基因敲除與細胞增殖的關系。分別于24、48、72、96、120h測定吸光度值。在72、96、120h，ZR-75-30細胞系中，SF3B1敲除組吸光度值與相應的陰性對照組相比明顯降低(P<0.05)(圖3b)。圖3.SF3B1敲除在體外抑制ZR-75-30細胞增殖和集落形成。(a)與陰性對照組相比，SF3B1敲除組集落形成數(shù)減少(P<0.01)。(b)SF3B1敲除抑制ZR-75-30細胞的增殖(P<0.05)。


本文編號：3260540