第一部分體外誘導外周血記憶B淋巴細胞分化抗原特異性漿細胞方法的建立背景:新型感染性疾病因其傳染性強易導致暴發(fā)流行,抗體作為免疫防治的策略之一,可以用于應急預防以及重癥患者的治療。全人源單克隆抗體（單抗）具有特異性高、毒副作用低、可大量生產等優(yōu)點。新型感染性疾病爆發(fā)流行,快速篩選相應的中和抗體可以用于預防和治療。中和抗體的制備通常采用患者恢復期外周血單個核淋巴細胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,但是患者恢復期PBMCs中特異性漿細胞含量極低,難以捕獲。體外誘導PBMCs中記憶B淋巴細胞（后簡稱B細胞）分化抗原特異性漿細胞的方法可獲得大量漿細胞用以抗體基因的提取,為全人源單抗的制備提供研究基礎。目的:本研究旨在建立體外誘導外周血記憶B細胞增殖并分化抗原特異性漿細胞的方法,以期自PBMCs中獲得大量抗原特異性漿細胞用以分離抗體基因,為制備高親和力的、具有中和作用的全人源單抗藥物研究提供研究基礎。方法:本研究收錄接種乙肝疫苗超過3年以上的健康志愿者,使用密度梯度離心法分離PBMCs,分別使用TLR7/8激動劑R848或TLR9激動劑CpG ... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同劑量的TLR7/8激動劑R848誘導記憶B細胞活化

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文28B.C.圖2R848誘導記憶B細胞分化為漿細胞的最早時間為了確定R848與IL-2結合在體外激活B細胞的最早時間，我們分別在第4、5和6日檢測漿細胞。（A）ELISA檢測不同刺激日數(shù)細胞上清中IgG分泌量（***P<0.001）。（B）ELISPOT分析不同刺激日數(shù)、不同細胞密度中ASCs的數(shù)量（不同日數(shù)下，左側為未刺激組，右側為刺激組，數(shù)字代表漿細胞數(shù)）。（C）細胞密度為10×103個細胞時，ELISPOT分析漿細胞分泌抗體斑點結果。Figure2TheearliesttimetoinducememoryBcellstodifferentiateintoplasmacells.TodeterminetheearliesttimethatR848incombinationwithIL-2toactivateBcellsinvitro,weculturedthePBMCsfromhealthydonorsfor4,5and6dayswithR848combinationwithIL-2.(A)ELISAdetectedIgGsecretionindifferentstimulationdays.ErrorbarsindicateSEM,representativeof3experiments,bypairedt-test(***P<0.001).(B)ELISPOTdetectedmemoryBcellexpansionanddifferentiationintoASCsondays4,5and6.Takedifferentcellnumbersforstatisticsafterdetection.(C)ELISPOTs.Thecelldensitywas10x103,ELISPOTanalyzedtheresultsofplasmacellsecretionantibodyspots.

IL-10對R848誘導的B細胞活化的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Improvement in affinity and thermostability of a fully human antibody against interleukin-17A by yeast-display technology and CDR grafting[J]. Wei Sun,Zhaona Yang,Heng Lin,Ming Liu,Chenxi Zhao,Xueying Hou,Zhuowei Hu,Bing Cuin.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(05)



本文編號：3117565