第一部分體外誘導(dǎo)外周血記憶B淋巴細(xì)胞分化抗原特異性漿細(xì)胞方法的建立背景:新型感染性疾病因其傳染性強(qiáng)易導(dǎo)致暴發(fā)流行,抗體作為免疫防治的策略之一,可以用于應(yīng)急預(yù)防以及重癥患者的治療。全人源單克隆抗體（單抗）具有特異性高、毒副作用低、可大量生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。新型感染性疾病爆發(fā)流行,快速篩選相應(yīng)的中和抗體可以用于預(yù)防和治療。中和抗體的制備通常采用患者恢復(fù)期外周血單個(gè)核淋巴細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,但是患者恢復(fù)期PBMCs中特異性漿細(xì)胞含量極低,難以捕獲。體外誘導(dǎo)PBMCs中記憶B淋巴細(xì)胞（后簡(jiǎn)稱B細(xì)胞）分化抗原特異性漿細(xì)胞的方法可獲得大量漿細(xì)胞用以抗體基因的提取,為全人源單抗的制備提供研究基礎(chǔ)。目的:本研究旨在建立體外誘導(dǎo)外周血記憶B細(xì)胞增殖并分化抗原特異性漿細(xì)胞的方法,以期自PBMCs中獲得大量抗原特異性漿細(xì)胞用以分離抗體基因,為制備高親和力的、具有中和作用的全人源單抗藥物研究提供研究基礎(chǔ)。方法:本研究收錄接種乙肝疫苗超過(guò)3年以上的健康志愿者,使用密度梯度離心法分離PBMCs,分別使用TLR7/8激動(dòng)劑R848或TLR9激動(dòng)劑CpG ... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同劑量的TLR7/8激動(dòng)劑R848誘導(dǎo)記憶B細(xì)胞活化

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文28B.C.圖2R848誘導(dǎo)記憶B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞的最早時(shí)間為了確定R848與IL-2結(jié)合在體外激活B細(xì)胞的最早時(shí)間，我們分別在第4、5和6日檢測(cè)漿細(xì)胞。（A）ELISA檢測(cè)不同刺激日數(shù)細(xì)胞上清中IgG分泌量（***P<0.001）。（B）ELISPOT分析不同刺激日數(shù)、不同細(xì)胞密度中ASCs的數(shù)量（不同日數(shù)下，左側(cè)為未刺激組，右側(cè)為刺激組，數(shù)字代表漿細(xì)胞數(shù)）。（C）細(xì)胞密度為10×103個(gè)細(xì)胞時(shí)，ELISPOT分析漿細(xì)胞分泌抗體斑點(diǎn)結(jié)果。Figure2TheearliesttimetoinducememoryBcellstodifferentiateintoplasmacells.TodeterminetheearliesttimethatR848incombinationwithIL-2toactivateBcellsinvitro,weculturedthePBMCsfromhealthydonorsfor4,5and6dayswithR848combinationwithIL-2.(A)ELISAdetectedIgGsecretionindifferentstimulationdays.ErrorbarsindicateSEM,representativeof3experiments,bypairedt-test(***P<0.001).(B)ELISPOTdetectedmemoryBcellexpansionanddifferentiationintoASCsondays4,5and6.Takedifferentcellnumbersforstatisticsafterdetection.(C)ELISPOTs.Thecelldensitywas10x103,ELISPOTanalyzedtheresultsofplasmacellsecretionantibodyspots.

IL-10對(duì)R848誘導(dǎo)的B細(xì)胞活化的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Improvement in affinity and thermostability of a fully human antibody against interleukin-17A by yeast-display technology and CDR grafting[J]. Wei Sun,Zhaona Yang,Heng Lin,Ming Liu,Chenxi Zhao,Xueying Hou,Zhuowei Hu,Bing Cuin.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(05)



本文編號(hào)：3117565