目的:以小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞系TM3細(xì)胞為模型,研究自噬/Nrf2信號(hào)通路在錳致睪丸間質(zhì)細(xì)胞氧化損傷中的相互調(diào)控作用機(jī)制,為錳中毒職業(yè)人群的防治提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.TM3細(xì)胞分別暴露于MnCl₂ 0μM（空白對(duì)照組,C）、100μM（低劑量組,L）、200μM（中劑量組,M）、300μM（高劑量組,H）24 h。觀察細(xì)胞形態(tài),MTT比色法測(cè)定細(xì)胞活力,DCFH-DA探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS（Reactive Oxygen Species）水平,TBA法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量,WST-8法檢測(cè)總超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性,總谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（Glutathione peroxidase,GPx）檢測(cè)試劑盒測(cè)定總GPx活性,流式細(xì)胞儀檢測(cè)Annexin V/PI雙染后細(xì)胞凋亡率,透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)自噬,Western blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白p-Beclin1、p62、LC3Ⅱ/Ⅰ、Nrf2信號(hào)通路相關(guān)蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1及凋亡相關(guān)蛋白Active caspas... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度錳對(duì)TM3細(xì)胞活力的影響

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文李嬌263.2不同濃度錳暴露對(duì)TM3細(xì)胞形態(tài)的影響使用倒置相差顯微鏡觀察不同濃度錳暴露24h后的形態(tài)。C組細(xì)胞貼壁良好，單層生長(zhǎng)，胞體豐滿(mǎn)，伸出突起，細(xì)胞呈梭形、多邊形，隨錳濃度增加，細(xì)胞突起回縮、變短甚至消失，漂浮細(xì)胞逐漸增多，說(shuō)明錳濃度增加對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生了毒性作用。見(jiàn)圖2。MnCl2濃度(μM)C(0)L(100)M(200)H(300)圖2倒置相差顯微鏡觀察不同處理組的細(xì)胞形態(tài)學(xué)(標(biāo)尺=100μm；→：漂浮細(xì)胞)Fig.2ThemorphologicalchangesofTM3cellsunderdifferentconcentrationsofMnCl2(Scaleplate=100μm；→：Floatingcells)3.3不同濃度MnCl2處理對(duì)TM3細(xì)胞內(nèi)ROS、MDA含量的影響不同濃度MnCl2處理對(duì)TM3細(xì)胞內(nèi)ROS、MDA含量的影響如圖3所示。由結(jié)果可知錳暴露后細(xì)胞內(nèi)ROS、MDA含量均明顯升高。與C組比較，M、H組ROS、MDA含量均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與L組比較，H組ROS、MDA含量均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示染錳后細(xì)胞內(nèi)自由基含量增加，氧化作用增強(qiáng)。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文李嬌27圖3不同處理組對(duì)TM3細(xì)胞ROS、MDA的影響Fig.3EffectsofdifferenttreatmentgroupsonROSandMDAinTM3cells.(a:P＜0.05ascomparedtogroupC;b:P＜0.05ascomparedtogroupL.TheresultsareexpressedbytheMean±S.D.ofatleastthreeindependentexperiments.)3.4不同濃度MnCl2處理對(duì)TM3細(xì)胞內(nèi)總SOD和總GPx活力影響3.4.1不同濃度錳處理細(xì)胞后，細(xì)胞中總SOD和總GPx活力如圖4，兩者活力均明顯下降。與C組比較，M、H組SOD和總GPx活力降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與L組比較，H組SOD和總GPx活力仍降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。說(shuō)明錳暴露后細(xì)胞抗氧化酶活力降低，提示細(xì)胞抗氧化能力下降。


本文編號(hào)：3075568