胎盤的氧化應(yīng)激存在于整個(gè)妊娠期,只有當(dāng)氧化應(yīng)激超過正常生理水平時(shí)才會(huì)出現(xiàn)妊娠并發(fā)癥。滋養(yǎng)細(xì)胞系具有均一的細(xì)胞群和易干預(yù)等特點(diǎn),因此常被用于氧化應(yīng)激研究。然而,當(dāng)使用不同的氧化應(yīng)激細(xì)胞模型時(shí),常會(huì)出現(xiàn)相互矛盾的結(jié)果。本研究的目的是描繪妊娠并發(fā)癥研究中常用的不同氧化應(yīng)激模型的細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的代謝譜。HTR8/Svneo細(xì)胞,人絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞,在5種不同條件下處理誘導(dǎo)氧化應(yīng)激:缺氧（1%O₂）;缺氧（1%O₂）復(fù)氧（21%O₂）;氯化鈷（Cobalt chloride,CoCl₂;300μmol/l）;硝普鈉（Sodium nitroprusside,SNP;2.5mmol/l）和子癇前期孕婦血清（10%v/v）。從細(xì)胞中提取細(xì)胞內(nèi)代謝物,從培養(yǎng)基中收集細(xì)胞外代謝物,用氣相色譜-質(zhì)譜（Gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）法進(jìn)行代謝組學(xué)分析。結(jié)果表明,不同細(xì)胞模型的胞內(nèi)和胞外代謝組存在明顯差異,外源性藥物如氯化鈷和硝普納處理組的結(jié)果更相似。這些不同細(xì)胞模型代... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞活力測定法測定CoCl2和SNP的處理濃度

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文12看到SNP組與正常8h對照組有明顯的分離趨勢。同時(shí)CoCl2組和HR組與正常24h對照組之間也存在明顯差異。與此同時(shí)，缺氧組和PE組與正常24h對照組比較，沒有明顯分離趨勢。前兩個(gè)主成分解釋了各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)代謝物的58.7%和11.7%的差異。通過與質(zhì)譜文庫相比，共鑒定出了103種代謝物，其中33種在氧化應(yīng)激細(xì)胞模型與正常對照組中均被檢測出且存在顯著性差異（P<0.05,Q<0.05；圖3）。使用CoCl2和SNP處理的氧化應(yīng)激細(xì)胞模型中，細(xì)胞內(nèi)飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸水平均較其相應(yīng)對照組低。在CoCl2組中，谷胱甘肽、四種氨基酸、兩種氨基酸衍生物和所有的三羧酸（tricarboxylicacid，TCA）循環(huán)中間產(chǎn)物均較正常24h對照組低。相反地，在接受HR處理的細(xì)胞中，九種不飽和脂肪酸、六種飽和脂肪酸、谷胱甘肽、兩種氨基酸和兩種TCA循環(huán)中間產(chǎn)物較對照組有明顯升高趨勢。當(dāng)細(xì)胞經(jīng)PE血清培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)代謝物水平呈不同的改變趨勢（6種代謝物增加，5種代謝物減少）。在缺氧條件下，只有兩種代謝物，花生四烯酸和琥珀酸，呈顯著性降低（圖3）。五種氧化應(yīng)激細(xì)胞模型的細(xì)胞內(nèi)代謝譜差異很大。圖2.七種不同條件下HTR8/SVneo細(xì)胞代謝譜的主成分分析圖。具有相似代謝物特征的樣本則更接近。彩色橢圓表示95%置信區(qū)間。Figure2.PCanalysisplotofthemetabolicprofilesofHTR8/SVneocellstreatedundersevendifferentconditions.

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文13圖3.五種氧化應(yīng)激細(xì)胞模型細(xì)胞內(nèi)代謝譜差異熱圖。細(xì)胞內(nèi)代謝物與相應(yīng)對照組的相對水平用log2取對數(shù)表示。紅色方塊表示氧化應(yīng)激細(xì)胞模型組的代謝物濃度高于對照組，而綠色方塊表示氧化應(yīng)激細(xì)胞模型組的代謝物濃度低于對照組。（P<0.05，Q<0.05）Figure3.Heatmapdemonstratingdifferencesintheintracellularmetabolomeacrossfiveoxidativestresscellmodels,whencomparedtotheircorrespondingcontrolgroup.2.3五種氧化應(yīng)激細(xì)胞模型的細(xì)胞外代謝譜


本文編號：3060099