目的:探索利用人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs）與生物基質(zhì)體外預(yù)制“人工羊膜”,并對“人工羊膜”進(jìn)行體外立體培養(yǎng)。方法:采用雙酶消化法分離提取hAMSCs,并行貼壁培養(yǎng)、純化傳至P3代,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)對hAMSCs進(jìn)行鑒定;用于后續(xù)與BD基質(zhì)膠（BD-matrigel,BDM）混合制備“人工羊膜”。用混合法按體積1:1比例將干細(xì)胞與BDM結(jié)合,制成底面積為2 cm²,厚約3-5 mm,濃度為3×10⁵/mL的圓形薄膜,即“人工羊膜”,將其置于三維的培養(yǎng)體系中培養(yǎng)（實(shí)驗(yàn)組）;同期將3×10⁵/mL濃度,不含BDM的hAMSCs置于相同培養(yǎng)體系中（對照組）。在hAMSCs培養(yǎng)的第1、4、7 d時(shí),分別在普通光學(xué)顯微鏡下觀察兩種不同培養(yǎng)方式下細(xì)胞的生長狀態(tài)及形態(tài)變化。使用AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡試劑盒對實(shí)驗(yàn)組和對照組中的hAMSCs進(jìn)行染色,用流式細(xì)胞儀（flow cytometer,FCM）上機(jī)檢測,計(jì)算出AnnexinV-FITC/... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

流式細(xì)胞儀檢測hAMSCs細(xì)胞表面抗原的表達(dá)情況

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文李會(huì)興14圖2對照組hAMSCs(P1、P2、P3)的形態(tài)學(xué)觀察(×40)2.2“人工羊膜”的整體外觀第三代hAMSCs與BDM按體積1：1混合，制作成底面積為2cm2、厚度為3-5mm、細(xì)胞濃度為3×105cells/mL的圓形均勻薄膜，即“人工羊膜”(見圖3)。圖3“人工羊膜”的整體外觀形態(tài)觀察2.3實(shí)驗(yàn)組間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察實(shí)驗(yàn)組hAMSCs在不同倍鏡下表現(xiàn)為均勻分布，呈不規(guī)則球形生長(圖4)。細(xì)胞在三維狀態(tài)下生長狀態(tài)良好。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文李會(huì)興14圖2對照組hAMSCs(P1、P2、P3)的形態(tài)學(xué)觀察(×40)2.2“人工羊膜”的整體外觀第三代hAMSCs與BDM按體積1：1混合，制作成底面積為2cm2、厚度為3-5mm、細(xì)胞濃度為3×105cells/mL的圓形均勻薄膜，即“人工羊膜”(見圖3)。圖3“人工羊膜”的整體外觀形態(tài)觀察2.3實(shí)驗(yàn)組間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察實(shí)驗(yàn)組hAMSCs在不同倍鏡下表現(xiàn)為均勻分布，呈不規(guī)則球形生長(圖4)。細(xì)胞在三維狀態(tài)下生長狀態(tài)良好。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在短肽水凝膠中的三維培養(yǎng)研究[D]. 張玲.遵義醫(yī)學(xué)院 2018
[3]宮腔粘連電切術(shù)后羊膜移植羊膜放置方式的臨床研究[D]. 吳本媛.重慶醫(yī)科大學(xué) 2018



本文編號：3059920