目的:探究黃芩苷（Baicalin）對(duì)膽管癌細(xì)胞的抑制作用及其分子機(jī)制。方法:（1）Baicalin對(duì)膽管癌細(xì)胞活性的影響:體外培養(yǎng)膽管癌細(xì)胞QBC939和RBE,不同濃度的Baicalin處理后,通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活性。（2）Baicalin影響膽管癌細(xì)胞活性的機(jī)制:使用mTORC1信號(hào)通路抑制劑Rapa（雷帕霉素）或AZD（ATP競(jìng)爭(zhēng)性mTOR激酶抑制劑）處理QBC939和RBE細(xì)胞后,通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活性。（3）Baicalin對(duì)膽管癌細(xì)胞增殖的影響:不同濃度的Baicalin處理QBC939和RBE細(xì)胞后,通過鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)速度,以及使用平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞增殖的情況。（4）Baicalin影響膽管癌細(xì)胞增殖的機(jī)制:不同濃度的Baicalin處理QBC939和RBE細(xì)胞后,通過Western blot檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1和細(xì)胞周期蛋白抑制激酶p27的蛋白表達(dá)水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期。此外,Baicalin處理細(xì)胞后,使用siRNA干擾c-Myc,Western blot檢測(cè)p27和Cyclin D1的蛋白水平。（5）Baicali... 

【文章來(lái)源】：西南醫(yī)科大學(xué)四川省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Baicalin抑制QBC939和RBE細(xì)胞活性

-39-和c-caspase3（caspase3的剪切條帶）的蛋白表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Baicalin促進(jìn)了-PARP和c-caspase3的表達(dá)，并在一定時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)濃度依賴性（圖2A）。另外，使用200μmBaicalin處理QBC939和RBE細(xì)胞后，在不同時(shí)間段（0，6，12，24和36h）檢測(cè)上述凋亡標(biāo)志物的蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)它們同樣以時(shí)間依賴性的方式逐漸增加（圖2B）。以上結(jié)果表明，Baicalin可以誘導(dǎo)人膽管癌細(xì)胞凋亡。圖2.Baicalin誘導(dǎo)QBC939和RBE細(xì)胞凋亡Figure2.BaicalininducescellapoptosisofQBC939andRBEcells圖2：（A）Baicalin促進(jìn)QBC939和RBE細(xì)胞中-PARP和c-caspase3的表達(dá)，且呈現(xiàn)濃度依賴性；（B）Baicalin促進(jìn)QBC939和RBE細(xì)胞中PARP和c-caspase3的表達(dá)，且呈現(xiàn)時(shí)間依賴性。3Baicalin抑制mTOR信號(hào)通路眾所周知，mTOR信號(hào)通路可以調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，在細(xì)胞癌變過程中起著至關(guān)重要的作用[43]，因此我們接下來(lái)探究了mTOR信號(hào)通路是否參與了Baicalin誘導(dǎo)人膽管癌細(xì)胞凋亡的過程。Westernblot結(jié)果顯示，Baicalin處理的QBC939和RBE細(xì)胞中mTORC1（mTOR復(fù)合物1）信號(hào)通路下游

-40-標(biāo)志物P70s6k和S6的磷酸化水平明顯降低，且呈現(xiàn)濃度依賴性（圖3A），這提示Baicalin可能通過mTORC1-P70s6K抑制人膽管癌細(xì)胞活性。為了驗(yàn)證mTORC1-P70s6k信號(hào)通路在人膽管癌細(xì)胞活性中的作用，分別采用雷帕霉素（Rapa）和AZD-8055（AZD）兩種mTOR復(fù)合體抑制劑處理QBC939和RBE細(xì)胞，隨后通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活性。如圖3B所示，加入Rapa或AZD明顯降低了兩種膽管癌細(xì)胞的活性。與此同時(shí)，PARP和c-caspase3的蛋白表達(dá)水平明顯增加，尤其是在AZD處理的情況下（圖3C）。值得注意的是，Westernblot結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Baicalin處理后顯著增加了raptor（Ser792）的磷酸化（圖3D），而raptor（Ser792）的磷酸化是mTORC1中不可缺少的負(fù)調(diào)節(jié)因子之一。以上結(jié)果表明Baicalin可能通過促進(jìn)QBC939和RBE細(xì)胞中raptor磷酸化抑制mTOR信號(hào)通路。圖3.Baicalin抑制mTOR信號(hào)通路Figure3.BaicalininhibitsmTORsignalingpathway圖3：（A）Baicalin抑制QBC939和RBE細(xì)胞中P70s6k和S6的磷酸化，且呈現(xiàn)濃度依賴性；（B）Rapa和AZD抑制QBC939和RBE細(xì)胞活性；（C）Rapa和AZD促


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