本文關(guān)鍵詞：阿奇霉素注射液潛在致心律失常風險的機制研究　出處：《南京中醫(yī)藥大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關(guān)文章： 阿奇霉素注射液 心電圖 心律失常 L型鈣電流 Na~+電流 快速性延遲整流鉀電流I_(Kr)

【摘要】：目的:阿奇霉素是臨床常用的大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥,不良反應相對較少。但近幾年,有越來越多的證據(jù)表明阿奇霉素可能增加心血管死亡風險,尤其是心律失常的發(fā)生�？v觀大量文獻報道,未見有對其在動物水平上的致心律失常的機制研究。為了驗證這一風險存在的真實性,降低臨床用藥的不良反應發(fā)生率,所以我們對此藥進行了一系列基礎(chǔ)的心臟安全性評價實驗。藥物與試劑馬來酸阿奇霉素注射液(津博),規(guī)格0.25 g,從南京市仙林鼓樓醫(yī)院購買,生產(chǎn)批號081406026,國藥準字H20020293,生產(chǎn)廠家:天津生物化學制藥有限公司。其他化學試劑大部分購自Sigma公司,小部分購自國產(chǎn)代理商。動物豚鼠,質(zhì)量250～350g,雄性,由南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場提供。實驗動物生產(chǎn)許可證:SCXK(滬)2013-0006。方法:1.豚鼠在體心電圖記錄:20%烏拉坦(5 mL/kg)對豚鼠進行腹腔麻醉,以仰臥位進行固定,分出一側(cè)頸靜脈,進行插管,再給藥。四肢皮下扎入針形電極引導記錄Ⅱ?qū)?lián)心電信號,經(jīng)四道生理記錄儀采樣并存入計算機。于靜脈推注藥物5 min后記錄心電圖,分析心率(HR)、P-R間期、QRS間期和QTc間期。按照阿奇霉素注射液說明書規(guī)定的:成人用量為每人每天500 mg(靜脈滴注),在體實驗采用500 mg為1倍臨床劑量,即8.3 mg/kg.(按成人60 kg計算)。人體與動物用藥量按體表面積系數(shù)計算,以每公斤體重進行比較。國際標準:豚鼠的劑量為人用劑量的4.6倍,基于這種換算原則,豚鼠在體一倍劑量為38.2 mg/kg,依次類推。2.豚鼠離體心電圖記錄:20%烏拉坦(5 mL/kg)對豚鼠腹腔注射麻醉,固定后迅速開胸取出心臟,置于0℃C的無鈣灌流液中。應用改進的Langendorff裝置灌流系統(tǒng),經(jīng)主動脈進行離體心臟灌流,心臟復跳后在心外膜下置3根銀絲電極:正極置于心尖處,負極置于右心房,接地電極置于主動脈根部,引導出離體心臟心電圖。待豚鼠心臟跳動穩(wěn)定后,信號經(jīng)四道生理記錄儀輸入計算機記錄,分析心率(HR)、P-R間期、QRS間期和QTc間期。按照阿奇霉素注射液說明書規(guī)定的:成人用量為每人每天500 mg(靜脈滴注),即8.3 mg/kg(按成人60 kg計算)。成人細胞外液約占體重的20%,那么換算成臨床血藥濃度即為41.5 mg/L,據(jù)上述方法換算后,離體實驗的組織和細胞灌流液1倍臨床濃度為41.5 mg/L。豚鼠的離體心臟心電圖實驗按照1,5,10倍的臨床濃度給藥,每一濃度的灌流液體積為20 mL,灌流速度約2～3 mL/min。3.豚鼠左心室乳頭肌動作電位記錄:用20%烏拉坦(5mL/kg)對豚鼠進行腹腔麻醉,快速開胸取出心臟,置于0～4℃無鈣臺氏液中停止搏動,剪下左心室乳頭肌,將其固定于恒溫(35.5～36.5℃水浴槽底部。恒溫恒速條件下用含鈣臺氏液灌流,穩(wěn)定30 min后進行實驗。刺激頻率1Hz,波寬10 ms,強度1.5倍閾值的方波刺激。信號經(jīng)放大器、數(shù)模轉(zhuǎn)換器顯示于電腦屏幕并記錄在計算機內(nèi)部,分析動作電位復極50%(APD50)及90%(APD90)水平的時程。4.豚鼠左心室單個肌細胞動作電位記錄:用改良后的酶解法分離豚鼠單個心室肌細胞。健康豚鼠,雄性,250～300g。腹腔注射20%烏拉坦(5mL/kg),在100%氧飽和的0℃無鈣臺氏液中清洗修剪,并將其固定在改良的Langendorff心臟灌流裝置上,在37℃的恒溫,充氧(95%O_2+5%CO_2)條件下,用無鈣灌流液持續(xù)逆向灌流,使心臟先復跳后停跳,再用含消化酶(Collage-naseⅡ2 mg/mL,胰蛋白酶0.1mg/mL)的無鈣灌流液反復灌流40min,至心臟膨大、松弛,最后再用適量KB液灌流沖洗。取下心臟,將消化后的左心室肌組織塊置于盛有KB液的玻璃皿中充分剪碎,用直徑200 μm的尼龍網(wǎng)過濾,將細胞懸液導入離心管中,靜置,KB液洗三次。最后置于室溫下備用。無鈣灌流液的組成(mM):NaCl 135,KC1 5.4,NaH_2PO_4 0.33,MgCl_2 1,HEPES 5,Glucose 10,pH 用 NaOH 調(diào)至 7.4。KB 液組成(mM):KC1 25,NaH_2PO_4 10,L-谷氨酸 70,Taurine 10,EGTA 0.5,HEPES 20,Glucose 11,KOH 85,pH 用 KOH 調(diào)至 7.4。采用膜片鉗全細胞電流鉗記錄方法,在室溫(22～25℃)下進行。將細胞懸液數(shù)滴加入倒置顯微鏡上的灌流槽中,待細胞穩(wěn)定后,用細胞外液灌流。其組成為(mM):NaCl 117,KC15.7,NaHCO_3 4.4,MgCl_2 1.7,HEPES 20,Glucose 20,Taurine 20,CaCl_2 1.8,用 NaOH 調(diào)節(jié) pH至7.3。選取桿狀,橫紋清晰,表面無顆粒,無收縮的細胞進行封接實驗。玻璃毛細管經(jīng)微電極拉制儀兩步拉制成尖端直徑約為1μm的電極,電極充灌內(nèi)液后入水阻抗約2～5 MΩ,電極內(nèi)液組成(mM):KCl 135,EGTA 10,Glucose 5,HEPES 10,Na2-ATP 3,Na-GTP 0.5,pH用KOH調(diào)至7.1。調(diào)節(jié)三維操縱器使電極尖端移向細胞表面進行封接。在電壓鉗模式下測電阻,當封接電阻達到1GΩ以上后補充快電容,并給予負壓破膜形成全細胞記錄模式。在電流鉗模式下記錄動作電位,電信號由膜片鉗放大器放大,再經(jīng)數(shù)模轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換與計算機對接,在電腦屏幕上顯示出電變化,信號的發(fā)放、采集與數(shù)據(jù)分析均由Clampfit 10.4(Axon Instruments,USA)軟件完成,并將數(shù)據(jù)存儲于電腦硬盤,分析動作電位復極50%(APD50)及90%(APD90)水平的時程。5.全細胞電壓鉗記錄L型鈣電流:采用膜片鉗全細胞電壓鉗記錄方法,在室溫(22～25℃)下進行。將細胞懸液數(shù)滴加入倒置熒光顯微鏡上的灌流槽中,細胞穩(wěn)定后,用細胞外液灌流。L 型鈣電流(Ica-L)記錄細胞外液組成(mM):NaCl 132,CsCl 5.4,CaCl_2 1.8,MgCl_2 1.8,NaH_2PO_4 0.6,4-AP 5,HEPES 10,Glucose 10,Na-pyruvate 5,pH 用 NaOH 調(diào)至 7.4。電極內(nèi)液組成(mM):CsCl 130,MgCl_2 2,EGTA 11,HEPES 20,Glucose 10,Na_2-ATP 2,Na-GTP 0.1,pH 用 NaOH 調(diào)至 7.4。刺激程序:鉗制電壓為-80 mV,階躍到-40 mV并維持200 ms(使Na~+電流失活),然后施加到0 mV的300 ms試驗電壓。6.全細胞電壓鉗記錄Na+電流:采用膜片鉗全細胞電壓鉗記錄方法,在室溫(22～25℃C)下進行。將細胞懸液數(shù)滴加入倒置熒光顯微鏡的灌流槽中,細胞穩(wěn)定后,用細胞外液灌流。鈉電流(INa)記錄細胞外液組成(mM):NaCl 70,Choline-Cl 70,KCl 5.4,MgCl_2 1,CaCl_2 0.1,HEPES 10,Glucose 10,NaH_2PO_4 0.33。用 NaOH將pH 值調(diào)至 7.3。電極內(nèi)液組成(mM):CsCl 120,EGTA 11,HEPES 10,Na_2-ATP 5,MgCl_2 5,CaCl_2 1,Glucose 11。pH 用 CsOH 調(diào)至7.3。刺激程序:在電壓鉗狀態(tài)下,以10 mV的階躍使心室肌細胞由-90 mV的保持電壓逐步去極化至+60 mV,刺激電壓持續(xù)60 ms。7.全細胞電壓鉗記錄快速延遲整流鉀電流(Ikr):采用膜片鉗全細胞電壓鉗記錄方法,在室溫(22～25℃)下進行。將細胞懸液數(shù)滴加入倒置熒光顯微鏡上的灌流槽中,細胞穩(wěn)定后,用細胞外液灌流�？焖傺舆t整流鉀電流(IKr)記錄細胞外液組成(mM):NaCl 140,KC1 5.4,MgCl_2 1,CaCl_2 1.5,Glucose 10,HEPES 10,pH 用 NaOH 調(diào)至 7.4。電極內(nèi)液組成(mM):KC1 140,MgCl_2 1,Na_2-ATP 4,EGTA5,HEPES 10,pH用KOH調(diào)至7.3。此外細胞外液中還需加入200μmol/L的 4-AP 阻斷 Ito,20μmol/L 的 Chromanol 293B 阻斷 Iks,200μmol/L 的 BaCl_2 阻斷 Ik1,10μmol/L的硝苯地平阻斷Ica-L。刺激程序:采用常規(guī)全細胞膜片鉗記錄,實驗在室溫(22～25 ℃C)下進行,心室肌細胞鉗制在-40 mV,從-40 mV開始以階躍電壓10 mV的方式逐步去極化至60 mV,維持3000 ms,然后電壓復極至-40 mV,2000 ms誘發(fā)Ikr外向尾電流。結(jié)果:1.阿奇霉素注射液對豚鼠在體心臟心電圖的影響:結(jié)果顯示:阿奇霉素注射液1,3,5倍臨床劑量,既38.2 mg/kg→114.6 mg/kg→191 mg/kg按順序累計靜脈推注,AZM38.2mg/kg略微改變豚鼠在體心電圖各參數(shù),未有顯著性差異;AZM114.6mg/kg明顯改變豚鼠在體心電圖各參數(shù),并且AZM114.6mg/kg藥物組與對照組和AZM 38.2 mg/kg藥物組相比,具有顯著性差異。AZM 114.6 mg/kg能夠顯著降低心率,延長P-R間期和QTc間期,增大QRS波寬,降低QRS波和P波幅度;AZM 191 mg/kg,顯著降低心率,QRS波寬大變形,P波、T波消失。2.阿奇霉素注射液對豚鼠離體心臟心電圖的影響:結(jié)果顯示:阿奇霉素注射液1,5,10倍臨床濃度,按照41.5 mg/L → 207.5 mg/L→ 415 mg/L→Wash out的順序依次灌流,AZM 41.5 mg/L明顯降低心率,與對照組相比有顯著性差異;AZM207.5mg/L和AZM415mg/L明顯降低心率,延長P-R和QTc間期,增大QRS波寬,其中HR、P-R、QRS三指標變化與對照組及低劑量組形成顯著性差異,QTc只與對照組形成顯著性差異;含鈣灌流液洗脫后,各指標部分恢復。3.阿奇霉素注射液對豚鼠左心室乳頭肌動作電位的影響:不同濃度的AZM能夠不同程度的延長單個心肌細胞的動作電位時程(APD),且有一定的濃度依賴性;各濃度藥物組與對照組的APD50和APD90相比較,AZM830mg/L(20倍臨床濃度)組與對照組和AZM 41.5 mg/L(1倍臨床濃度)組有顯著性差異,而AZM 415 mg/L(10倍臨床濃度)組與對照組也形成顯著性差異。4.阿奇霉素注射液對豚鼠單個心室肌細胞動作電位的影響:不同濃度的AZM能夠不同程度的延長單個心肌細胞的動作電位時程(APD),且有一定的濃度依賴性;各濃度藥物組與對照組的APD50和APD90相比較,只有AZM830 mg/L(20倍臨床濃度)組與對照組和AZM 41.5 mg/L(1倍臨床濃度)組有顯著性差異。5.阿奇霉素注射液對豚鼠左心室肌細胞L型鈣電流的影響:各濃度阿奇霉素都能明顯抑制L-型鈣通道,與低濃度組相比,各高濃度組對ICa-L的平均抑制率都具有顯著性差異(P0.05),AZM 1245 mg/L(30倍臨床濃度)組和AZM 2075 mg/L(50倍臨床濃度)組的抑制率都大于50%,故AZM抑制L型鈣電流的IC500小于1245 mg/L,為942.5±68.4 mg/L。6.阿奇霉素注射液對Na~+電流的影響:各濃度阿奇霉素都能明顯抑制鈉通道,與低濃度組相比,各高濃度組對INa的平均抑制率都具有顯著性差異(P0.05),AZM 1245 mg/L(30倍臨床濃度)和AZM 2075 mg/L(50倍臨床濃度)抑制率都大于50%,故AZM的對Na+電流的IC50小于1245mg/L,為1123.0±87.9 mg/L。7.阿奇霉素注射液對Ikr的影響:阿奇霉素不同濃度對正常豚鼠單個心室肌細胞的快速性延遲整流鉀電流(IKr)都有一定的抑制作用,且存在濃度依賴性,AZM為最大實驗濃度2075 mg/L(50倍臨床濃度)時,對Ikr的抑制率僅為31%左右,故AZM抑制Ikr的IC50大于50倍臨床濃度。結(jié)論:1.通過豚鼠在體ECG和離體ECG實驗,能夠初步證明阿奇霉素注射液的確能夠造成心動過緩,穩(wěn)定誘發(fā)緩慢型心律失常。2.組織塊和單細胞動作電位實驗表明,AZM明顯延長APD50和APD90,使心臟復極延遲,進一步驗證了 AZM的致心律失常作用。3.離子通道實驗,阿奇霉素能夠不同程度阻滯L型鈣通道、鈉通道、快速延遲整流鉀電流通道,但AZM對ICa-L、INa抑制程度遠大于IKr,AZM濃度由低到高的過程,抑制ICa-L、INa先于Ikr,這與心電圖實驗結(jié)果相吻合。揭示AZM能誘導正常豚鼠發(fā)生房室傳導阻滯和心室內(nèi)傳導阻滯,這可能與其明顯抑制鈉、鈣通道有關(guān)。
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R96

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張玉興;;靜滴阿奇霉素注射液致溶血1例報告[J];山東醫(yī)藥;2008年30期

2 ;齊諾(阿奇霉素注射液)即將上市[J];中國臨床藥理學雜志;2000年02期

3 張園;蔣榮超;;阿奇霉素注射液致嚴重腹脹1例[J];中國中醫(yī)急癥;2006年09期

4 麻馨月;;阿奇霉素注射液在臨床應用的價值[J];醫(yī)學信息(中旬刊);2010年08期

5 于曉麗;;試析阿奇霉素注射液的不良反應[J];現(xiàn)代養(yǎng)生;2014年10期

6 修銳;王小虹;;枸櫞酸阿奇霉素注射液穩(wěn)定性及有效期預測[J];中國藥師;2007年03期

7 郭玉紅;;阿奇霉素注射液常見不良反應及護理對策[J];中國當代醫(yī)藥;2009年20期

8 黃劍;;減輕阿奇霉素注射液引發(fā)刺激疼痛的臨床護理[J];護理研究;2011年27期

9 王菊榮,李曉,楊學平;分光光度法測定阿奇霉素注射液的含量[J];解放軍藥學學報;2004年05期

10 王雪潔;甄文華;王惠榮;;阿奇霉素注射液致腳踝關(guān)節(jié)疼痛1例[J];中國醫(yī)院藥學雜志;2006年01期

相關(guān)碩士學位論文 前1條

1 張夢丹;阿奇霉素注射液潛在致心律失常風險的機制研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2017年

，

本文編號：1330552