本文關(guān)鍵詞：疏肝法對痰郁互結(jié)型非酒精性脂肪肝的治療效應(yīng)與作用機(jī)制研究

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【摘要】：目的現(xiàn)代社會,非酒精性脂肪肝發(fā)病率持續(xù)增高,年齡范圍逐漸擴(kuò)大。臨床發(fā)現(xiàn),部分非酒精性脂肪肝患者發(fā)病與社會應(yīng)激明顯相關(guān),辨證以肝郁為主,疏肝治療效果顯著。實驗發(fā)現(xiàn)應(yīng)激后HPA軸變化會導(dǎo)致胰島素抵抗與脂質(zhì)代謝異常。因此提出,對應(yīng)激相關(guān)非酒精性脂肪肝,應(yīng)重視從肝郁論治,其作用可能體現(xiàn)在對HPA軸、脂質(zhì)代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)、胰島素抵抗與氧化應(yīng)激的系統(tǒng)調(diào)節(jié)。本課題采用慢性束縛復(fù)合高脂飼料建立痰郁互結(jié)型非酒精性脂肪肝病證結(jié)合動物模型,應(yīng)用證候評價、病理切片等評價肝郁加重非酒精性脂肪肝的病變特點(diǎn),檢測皮質(zhì)醇水平、胰島素抵抗指數(shù)、脂質(zhì)代謝酶、肝功能等相關(guān)指標(biāo),觀察HPA軸、脂質(zhì)代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)、胰島素抵抗與氧化應(yīng)激多層面的變化,并探討四逆散對上述的干預(yù)作用。從而揭示肝郁加重肝脂肪變的作用和機(jī)制,闡明從"肝郁"論治脂肪肝的重要性,為臨床上大量應(yīng)激相關(guān)非酒精性脂肪肝患者的治療提供參考。方法(1)健康雄性Wistar大鼠70只,體重250±10g,實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,自由進(jìn)食進(jìn)水,經(jīng)曠場實驗篩選后隨機(jī)區(qū)組分為空白組(n=8),正常條件飼養(yǎng),4只/籠,不接受任何刺激;HFD組(n=8),自配高脂飼料飼養(yǎng),4只/籠,不接受任何刺激;CS組(n=8),正常條件飼養(yǎng),4只/籠,每日束縛6小時(7:00am-1:00pm);復(fù)合模型組(n=8),高脂飼料飼養(yǎng),4只/籠,每日束縛6小時(7:00am-1:00pm);四逆散組(n=8),高脂飼料飼養(yǎng),4只/籠,每日束縛6小時(7:00am-1:00pm),從實驗第4周(第29天)開始至實驗第8周(56天)結(jié)束,每日灌服四逆散水煎劑4.5mL/kg,生藥量4.0g/(kg*d),相當(dāng)于60kg成人體重的臨床用藥量;紅曲組(n=8),高脂飼料飼養(yǎng),4只/籠,每日束縛6小時(7:00am-1:00pm),從實驗第4周(第29天)開始至實驗第8周(56天)結(jié)束,每日灌服紅曲水煎劑4.5mL/kg,生藥量0.12g/(kg*d),相當(dāng)于60kg成人體重的臨床用藥量;聯(lián)合組n=8),高脂飼料飼養(yǎng),4只/籠,每日束縛6小時(7:00am-1:00pm),從實驗第4周(第29天)開始至實驗第8周(56天)結(jié)束,每日灌服四逆散聯(lián)合紅曲水煎劑4.5mL/kg,生藥量4.12g/(kg*d),相當(dāng)于60kg成人體重的臨床用藥量。造模時間8周,給藥4周。(2)每日觀察實驗動物一般情況、記錄攝食量,每2周進(jìn)行體重、曠場實驗得分、糖水偏嗜度的檢測記錄。稱量內(nèi)臟脂肪,計算內(nèi)臟肥胖指數(shù)。用以評價中醫(yī)證候模型。(3)應(yīng)用病理切片、紫外-乳酸脫氫酶法、紫外-蘋果酸脫氫酶法檢測各組大鼠ALT、AST的含量;稱量肝重、脾重,計算肝指數(shù)。用以評價疾病模型。(4)應(yīng)用rt-PCR、放射免疫分析法檢測海馬體皮質(zhì)醇受體mRNA基因表達(dá)與血清ACTH、皮質(zhì)醇的含量。用以評價HPA軸狀態(tài)。(5)應(yīng)用膽固醇氧化酶法、甘油磷酸氧化酶法、直接法、rt-PCR檢測大鼠血清總膽固醇、甘油三酯、HDL、LDL、肝內(nèi)HMG-CoA還原酶mRNA表達(dá)。用以評價脂質(zhì)代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)水平。(6)應(yīng)用放射免疫分析法、葡萄糖氧化酶法、冰凍切片氧化應(yīng)激超氧陰離子紅色熒光測定試劑盒檢測大鼠血清胰島素、空腹血糖、肝組織ROS等,用以評價胰島素抵抗與氧化應(yīng)激水平。結(jié)果(1)比較各組大鼠體重,結(jié)果顯示復(fù)合模型組較空白組體重?zé)o顯著性變化(P0.05),經(jīng)四逆散治療后無顯著變化(P0.05)。曠場實驗結(jié)果顯示:模型建立后復(fù)合模型組總得分較空白組顯著減少(P0.01),經(jīng)四逆散治療后增加(P0.05)。糖水實驗結(jié)果顯示:復(fù)合模型組糖水偏愛百分比均值低于空白組,經(jīng)四逆散治療后均值增加。攝食量結(jié)果顯示:復(fù)合模型組攝食量較空白組顯著減少(P0.01),經(jīng)四逆散治療后增加(P0.05)。內(nèi)臟肥胖指數(shù)結(jié)果顯示:復(fù)合模型組內(nèi)臟肥胖指數(shù)較空白組顯著增加(P0.05),經(jīng)四逆散治療后較空白組無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。證候評分結(jié)果顯示:復(fù)合模型組肝郁與痰濕證評分均高于空白組(P0.01),經(jīng)四逆散治療后降低(P0.05)(2)病理切片結(jié)果顯示:復(fù)合模型組油紅O染色著色面積明顯多于空白組,經(jīng)四逆散治療后著色面積明顯減少。血清AST結(jié)果顯示:復(fù)合模型組大鼠血清AST較空白組顯著升高(P0.01),經(jīng)四逆散治療后顯著降低(P0.01)。血清ALT結(jié)果顯示:復(fù)合模型組大鼠血清ALT較空白組顯著升高(P0.01),經(jīng)四逆散治療后無顯著變化(P0.05)。肝指數(shù)結(jié)果顯示:復(fù)合模型組肝指數(shù)較空白組顯著增加(P0.01),經(jīng)四逆散治療后降低(P0.05)。(3)海馬體皮質(zhì)醇受體mRNA相對表達(dá)量結(jié)果顯示:復(fù)合模型組較空白組顯著降低(P0.01),經(jīng)四逆散治療后升高(P0.05)。血清皮質(zhì)醇結(jié)果顯示:復(fù)合模型組大鼠血清皮質(zhì)醇較空白組明顯升高(P0.05),經(jīng)四逆散治療后低(P0.05)。(4)血清總膽固醇結(jié)果顯示:復(fù)合模型組較空白組無顯著變化(P0.05),經(jīng)四逆散治療后血清總膽固醇顯著降低(P0.01)。血清甘油三酯結(jié)果顯示:復(fù)合模型組較空白組無顯著變化(P0.05),經(jīng)四逆散治療后無顯著變化(P0.05)。血清FFA結(jié)果顯示:復(fù)合模型組較空白組血清FFA顯著升高(P0.01),經(jīng)四逆散治療后降低(P0.05)。血清HDL結(jié)果顯示:復(fù)合模型組血清HDL明顯降低(P0.05),經(jīng)四逆散治療后無顯著變化(P0.05)。血清LDL結(jié)果顯示:復(fù)合模型組血清LDL明顯升高(P0.05),經(jīng)四逆散治療后顯著降低(P0.01)。肝內(nèi)HMG-CoA還原酶mRNA表達(dá):復(fù)合模型組較空白組顯著升高(P0.01),經(jīng)四逆散治療后顯著降低(P0.01)。(5)氧化應(yīng)激超氧陰離子紅色熒光冰凍切片結(jié)果顯示:復(fù)合模型組熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于空白組,經(jīng)四逆散治療后熒光強(qiáng)度明顯減弱。胰島素抵抗指數(shù)計算結(jié)果顯示:復(fù)合模型組較空白組顯著升高(P0.01),經(jīng)四逆散治療后無顯著變化(P0.05)。血清TNF-a結(jié)果顯示:復(fù)合模型組較空白組明顯升高(P0.05),經(jīng)四逆散治療后降低(P0.05)。結(jié)論(1)應(yīng)激因素可以直接誘導(dǎo)非酒精性脂肪肝的發(fā)病,導(dǎo)致肝臟出現(xiàn)實質(zhì)性損傷,并且可以通過影響脂質(zhì)代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)、加劇胰島素抵抗程度加重非酒精性脂肪肝。即肝氣郁結(jié)是非酒精性脂肪肝發(fā)病的主要病機(jī)之一。(2)四逆散可以通過改善HPA軸狀態(tài)、氧化應(yīng)激狀態(tài)、脂質(zhì)代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)狀態(tài)系統(tǒng)調(diào)節(jié)應(yīng)激相關(guān)非酒精性脂肪肝,即痰郁互結(jié)型非酒精性脂肪肝。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R259

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1300218