本文關(guān)鍵詞：知識流出——連接外部環(huán)境與企業(yè)管理創(chuàng)新的橋梁，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】本研究將大麗輪枝菌在棉花組織誘導(dǎo)和非誘導(dǎo)（查比克基礎(chǔ)培養(yǎng)）體系中分別進(jìn)行培養(yǎng)，觀察其生長表型，提取分泌蛋白并進(jìn)行致病性研究。結(jié)果表明棉花組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基更適合大麗輪枝菌的生長，能夠促進(jìn)它產(chǎn)生更多的分生孢子，向培養(yǎng)上清液中分泌更多的蛋白質(zhì)，胞外蛋白接種棉花能夠引起更加典型的黃萎病癥�？梢�，棉花組織誘導(dǎo)體系可以誘導(dǎo)大麗輪枝菌分泌型致病蛋白的表達(dá)，通過其分泌蛋白譜差異分析，可以進(jìn)行潛在致病因子的挖掘。離子交換富集法分別提取棉花組織誘導(dǎo)與非誘導(dǎo)體系中大麗輪枝菌分泌蛋白，利用iTRAQ標(biāo)記和質(zhì)譜檢測技術(shù)進(jìn)行分泌蛋白差異分析。結(jié)果表明，棉花組織誘導(dǎo)體系中有502個(gè)蛋白被上/下調(diào)表達(dá)，變化倍數(shù)在1.5倍以上，，其中266個(gè)蛋白被注釋為潛在致病因子，包括221個(gè)預(yù)測的分泌蛋白、107個(gè)細(xì)胞壁水解酶類蛋白、86個(gè)宿主-病原菌互作（PHI）蛋白、17個(gè)小的富含半胱氨酸蛋白、2個(gè)乙烯誘導(dǎo)壞死蛋白和1個(gè)賴氨酸模體（LysM）蛋白。另外，97個(gè)分泌型細(xì)胞壁水解酶類蛋白顯著上調(diào)，它們主要參與果膠、纖維素和木質(zhì)素的降解。實(shí)時(shí)定量PCR對顯著上調(diào)的細(xì)胞壁水解酶進(jìn)行體內(nèi)表達(dá)水平檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們在大麗輪枝菌侵染棉花前和侵染后期基因低水平表達(dá)，在侵染的初期階段均被顯著誘導(dǎo)表達(dá)�？梢�，細(xì)胞壁水解酶在大麗輪枝菌侵染寄主過程中可能發(fā)揮著重要作用。比較基因組分析發(fā)現(xiàn)大麗輪枝菌參與果膠降解機(jī)制的酶類相比其它病原菌發(fā)生了明顯擴(kuò)增，尤其是GH28、GH43、PL1和PL3超家族成員。分泌蛋白譜鑒定結(jié)果中也發(fā)現(xiàn)了多個(gè)GH28、GH43、PL1和PL3超家族成員。其中，3個(gè)果膠裂解酶（PL3）超家族成員被顯著上調(diào)，其上調(diào)倍數(shù)分別為15.02±0.26，13.17±0.92和7.01±0.8。構(gòu)建PL3超家族進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)，VDAG3551位于一個(gè)獨(dú)立的進(jìn)化分支，其它PL3超家族成員位于另一個(gè)進(jìn)化分支。將VDAG3551（VdPL3.1）編碼基因敲除后，其突變體（ΔVdPL3.1）接種感病棉種的致病力明顯下降，從野生型61%下降到29.3%。將VDAG9536（VdPL3.3）編碼基因敲除后，其突變體（ΔVdPL3.3）接種感病棉種的致病力為54.5%，相比野生型幾乎沒有改變。綜上所述，本研究利用離子交換法對大麗輪枝菌VdG1在誘導(dǎo)和非誘導(dǎo)條件下的分泌蛋白進(jìn)行提取，通過iTRAQ標(biāo)記和質(zhì)譜鑒定技術(shù)對分泌蛋白組差異蛋白進(jìn)行定量分析，挖掘差異蛋白中潛在致病因子，分析大麗輪枝菌對棉花細(xì)胞壁組織的降解機(jī)制，驗(yàn)證了細(xì)胞壁水解酶PL3家族在大麗輪枝菌致病過程中的關(guān)鍵作用。
【作者】肖紅利；
【導(dǎo)師】戴小楓；
【作者基本信息】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，生化與分子生物學(xué)，2014，博士
【關(guān)鍵詞】大麗輪枝菌；分泌蛋白；致病因子；細(xì)胞壁水解酶；PL3；

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