本文關鍵詞：知識流出——連接外部環(huán)境與企業(yè)管理創(chuàng)新的橋梁，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】本研究將大麗輪枝菌在棉花組織誘導和非誘導（查比克基礎培養(yǎng)）體系中分別進行培養(yǎng)，觀察其生長表型，提取分泌蛋白并進行致病性研究。結果表明棉花組織誘導培養(yǎng)基更適合大麗輪枝菌的生長，能夠促進它產(chǎn)生更多的分生孢子，向培養(yǎng)上清液中分泌更多的蛋白質，胞外蛋白接種棉花能夠引起更加典型的黃萎病癥�？梢�，棉花組織誘導體系可以誘導大麗輪枝菌分泌型致病蛋白的表達，通過其分泌蛋白譜差異分析，可以進行潛在致病因子的挖掘。離子交換富集法分別提取棉花組織誘導與非誘導體系中大麗輪枝菌分泌蛋白，利用iTRAQ標記和質譜檢測技術進行分泌蛋白差異分析。結果表明，棉花組織誘導體系中有502個蛋白被上/下調表達，變化倍數(shù)在1.5倍以上，，其中266個蛋白被注釋為潛在致病因子，包括221個預測的分泌蛋白、107個細胞壁水解酶類蛋白、86個宿主-病原菌互作（PHI）蛋白、17個小的富含半胱氨酸蛋白、2個乙烯誘導壞死蛋白和1個賴氨酸模體（LysM）蛋白。另外，97個分泌型細胞壁水解酶類蛋白顯著上調，它們主要參與果膠、纖維素和木質素的降解。實時定量PCR對顯著上調的細胞壁水解酶進行體內表達水平檢測，結果發(fā)現(xiàn)它們在大麗輪枝菌侵染棉花前和侵染后期基因低水平表達，在侵染的初期階段均被顯著誘導表達�？梢�，細胞壁水解酶在大麗輪枝菌侵染寄主過程中可能發(fā)揮著重要作用。比較基因組分析發(fā)現(xiàn)大麗輪枝菌參與果膠降解機制的酶類相比其它病原菌發(fā)生了明顯擴增，尤其是GH28、GH43、PL1和PL3超家族成員。分泌蛋白譜鑒定結果中也發(fā)現(xiàn)了多個GH28、GH43、PL1和PL3超家族成員。其中，3個果膠裂解酶（PL3）超家族成員被顯著上調，其上調倍數(shù)分別為15.02±0.26，13.17±0.92和7.01±0.8。構建PL3超家族進化樹分析發(fā)現(xiàn)，VDAG3551位于一個獨立的進化分支，其它PL3超家族成員位于另一個進化分支。將VDAG3551（VdPL3.1）編碼基因敲除后，其突變體（ΔVdPL3.1）接種感病棉種的致病力明顯下降，從野生型61%下降到29.3%。將VDAG9536（VdPL3.3）編碼基因敲除后，其突變體（ΔVdPL3.3）接種感病棉種的致病力為54.5%，相比野生型幾乎沒有改變。綜上所述，本研究利用離子交換法對大麗輪枝菌VdG1在誘導和非誘導條件下的分泌蛋白進行提取，通過iTRAQ標記和質譜鑒定技術對分泌蛋白組差異蛋白進行定量分析，挖掘差異蛋白中潛在致病因子，分析大麗輪枝菌對棉花細胞壁組織的降解機制，驗證了細胞壁水解酶PL3家族在大麗輪枝菌致病過程中的關鍵作用。
【作者】肖紅利；
【導師】戴小楓；
【作者基本信息】中國農(nóng)業(yè)科學院，生化與分子生物學，2014，博士
【關鍵詞】大麗輪枝菌；分泌蛋白；致病因子；細胞壁水解酶；PL3；

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