多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)具有多種重要的生物學(xué)功能,動、植物中的PUFAs以18碳鏈長以下的脂肪酸為主,而20碳鏈長以上的脂肪酸可由某些產(chǎn)油微生物提供。高山被孢霉(Mortierella alpina)是一種脂質(zhì)含量可達(dá)自身干重50%以上的產(chǎn)油絲狀真菌,能合成多種高附加值的PUFAs,目前已經(jīng)是工業(yè)化生產(chǎn)花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)的主要菌株。二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶是三酰甘油(Triacylglycerol,TAG)合成途徑中的關(guān)鍵限速酶,在不同物種中對其進(jìn)行遺傳改造發(fā)現(xiàn)其能顯著影響TAG含量和組成。因?yàn)楦呱奖绘呙怪兄舅嶂饕訲AG形式積累且AA含量高達(dá)總脂肪酸的30%⁴0%,其二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶可能在這方面起到重要作用。本課題以高山被孢霉中二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶為研究對象,篩選高山被孢霉中的二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶編碼基因,在釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中異源表達(dá)進(jìn)行功能鑒定,將能增強(qiáng)脂質(zhì)積累的基因在高山被孢霉中進(jìn)行過表達(dá),探索其對高山被孢霉脂質(zhì)積累的影響,為提...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 緒論
    1.1 多不飽和脂肪酸與微生物油脂概述
        1.1.1 多不飽和脂肪酸
        1.1.2 產(chǎn)油微生物及微生物油脂
        1.1.3 高山被孢霉簡介
    1.2 微生物中三酰甘油合成途徑
        1.2.1 甘油-3-磷酸途徑
        1.2.2 相關(guān)酶的功能
    1.3 二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶的研究背景
        1.3.1 二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶的結(jié)構(gòu)和分類
        1.3.2 二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶的功能和應(yīng)用
        1.3.3 高山被孢霉中二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶的研究進(jìn)展
    1.4 立題依據(jù)和主要研究內(nèi)容
        1.4.1 立題依據(jù)
        1.4.2 主要研究內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株及質(zhì)粒
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要試劑配制方法
        2.1.5 培養(yǎng)基及其配方
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菌株的培養(yǎng)與保藏
        2.2.2 高山被孢霉中目的基因的篩選與生物信息學(xué)分析
        2.2.3 高山被孢霉二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶的克隆及異源表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.4 PEG/LiAc法構(gòu)建釀酒酵母重組菌
        2.2.5 釀酒酵母重組菌中異源蛋白表達(dá)水平
        2.2.6 外加底物后釀酒酵母轉(zhuǎn)化子中異源蛋白的催化選擇性
        2.2.7 釀酒酵母重組菌產(chǎn)脂情況
        2.2.8 高山被孢霉二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶的克隆及同源過表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.9 利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法過表達(dá)高山被孢霉二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶
        2.2.10 高山被孢霉重組菌株的篩選及驗(yàn)證
        2.2.11 高山被孢霉重組菌生長及產(chǎn)脂情況
        2.2.12 數(shù)據(jù)處理及分析方法
3 結(jié)果與討論
    3.1 高山被孢霉二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶的篩選和生物學(xué)信息分析
        3.1.1 同源性及保守域分析
        3.1.2 高山被孢霉二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶蛋白結(jié)構(gòu)分析
        3.1.3 高山被孢霉二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶原始轉(zhuǎn)錄水平分析
    3.2 高山被孢霉二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶功能驗(yàn)證
        3.2.1 釀酒酵母重組菌的構(gòu)建和篩選驗(yàn)證
        3.2.2 釀酒酵母重組菌中異源蛋白表達(dá)水平測定
        3.2.3 釀酒酵母重組菌產(chǎn)脂情況分析
        3.2.4 釀酒酵母重組菌中二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶催化選擇性分析
    3.3 高山被孢霉重組菌株的構(gòu)建和功能驗(yàn)證
        3.3.1 二元表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.2 高山被孢霉重組菌株的篩選及鑒定
        3.3.3 高山被孢霉重組菌生長和產(chǎn)脂分析
主要結(jié)論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄 Ⅰ：作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章
附錄 Ⅱ：材料與方法中附表
附錄 Ⅲ：部分氣相色譜峰圖



本文編號：3826215