發(fā)布時間：2020-05-27 10:28

【摘要】：本論文重點進行天麻醇提物參與灰樹花發(fā)酵,影響菌絲體β-葡聚糖及發(fā)酵液成分的研究。通過正交試驗優(yōu)化了灰樹花菌絲體β-葡聚糖提取工藝;在灰樹花發(fā)酵體系中添加不同濃度的天麻醇提物,研究天麻醇提物對灰樹花菌絲體生長、菌絲體多糖及β-葡聚糖含量的影響,采用高效液相色譜法測定了天麻醇提物中天麻素、對羥基苯甲醛及對羥基苯甲醇的含量,探明這三種成分中對灰樹花菌絲體生長、菌絲體多糖及β-葡聚糖增效貢獻力最大的成分及最適添加量;研究了對羥基苯甲醛對灰樹花發(fā)酵液成分變化規(guī)律的影響;研究了灰樹花發(fā)酵液對免疫低下小鼠免疫功能的影響。主要研究結(jié)果如下:考察了兩株灰樹花菌株(菌1和菌2)在相同培養(yǎng)與提取條件下菌絲體β-葡聚糖的產(chǎn)量,結(jié)果表明,菌2菌絲體β-葡聚糖的產(chǎn)量較高,確定以菌2進行菌絲體β-葡聚糖的提取工藝優(yōu)化。以灰樹花菌2菌絲體為原料,通過比較熱水浸提法、熱水-復合酶法、超聲波法、超聲波-復合酶法四種提取方法,試驗其菌絲體β-葡聚糖的提取技術(shù),結(jié)果表明,超聲波-復合酶法提取β-葡聚糖的得率高于其他三種方法的得率。在單因素試驗基礎上,采用正交試驗設計,以β-葡聚糖得率為評價指標,對超聲波-復合酶法的提取工藝條件進行優(yōu)化。結(jié)果表明,最佳提取工藝條件為超聲功率300 W,超聲時間15 min,復合酶添加量1.5%,酶解溫度40℃,在該條件下,β-葡聚糖得率可達2.80 mg/g。在灰樹花發(fā)酵體系中添加不同濃度天麻醇提物,研究天麻醇提物濃度對灰樹花菌絲體生長、菌絲體多糖及β-葡聚糖含量的影響,采用高效液相色譜法對天麻醇提物中天麻素、對羥基苯甲醛及對羥基苯甲醇的含量進行測定,結(jié)果表明,在天麻醇提物添加量為7 g/L時對灰樹花菌絲體生長、菌絲體多糖及β-葡聚糖的促進作用均是最好的,天麻醇提物中特征成分天麻素、對羥基苯甲醛、對羥基苯甲醇的含量分別為5.838 mg/g,1.107 mg/g,0.660 mg/g。在灰樹花發(fā)酵體系中添加不同濃度的三種單一天麻醇提物特征成分,探明這三種成分中對灰樹花菌絲體生長、菌絲體多糖及β-葡聚糖增效貢獻力最大的成分及最適添加量。結(jié)果表明,對羥基苯甲醛均是對灰樹花菌絲體生長、菌絲體多糖及β-葡聚糖增效貢獻力最大的成分,其最適添加量分別為100mg/L、250 mg/L和150 mg/L。研究了對羥基苯甲醛對灰樹花發(fā)酵液成分變化規(guī)律的影響,考察了對羥基苯甲醛對灰樹花發(fā)酵過程中菌絲量、還原糖、p H值、胞外多糖、胞外蛋白、發(fā)酵液提取物多酚黃酮類物質(zhì)含量的變化規(guī)律。結(jié)果表明對羥基苯甲醛均能一定程度促進灰樹花發(fā)酵液中多糖、蛋白質(zhì)、多酚黃酮類活性物質(zhì)的生物合成。以灰樹花發(fā)酵液為受試物,免疫力低下小鼠為受試對象,開展了灰樹花發(fā)酵液對小鼠免疫力的試驗。試驗結(jié)果,高劑量正常發(fā)酵液及三種劑量的天麻發(fā)酵液均能顯著提高免疫低下小鼠的脾腺指數(shù);各試驗組灰樹花發(fā)酵液均能顯著提高免疫低下小鼠耳腫脹度,刺激遲發(fā)型變態(tài)反應;高劑量正常發(fā)酵液和高劑量天麻發(fā)酵液能顯著提高小鼠血清Ig G含量;高、中劑量的正常發(fā)酵液和高、中天麻發(fā)酵液都能顯著提高小鼠血清Ig M含量。
【圖文】：

結(jié)果見圖2.1。由圖可知，標準曲線回歸方程式為 y=7.3958x+0.0017，R2=0.9994，，葡萄糖含量和吸光度值呈良好的線性關(guān)系，表明該標準曲線有較好的精確度，可用于多糖的測定。圖 2.1 葡萄糖標準曲線Fig. 2.1 Standard curve of glucose2.4.2 β-葡聚糖標準曲線的制作按照 2.3.4.3 節(jié)中β-葡聚糖標準曲線的測定方法繪制相應的標準曲線，結(jié)果見圖 2.2。由圖可知，標準曲線回歸方程式為 y=7.1107x-0.0058，R2=0.9995，β-葡聚糖含量和吸光度值呈良好的線性關(guān)系

圖 2.2 β-葡聚糖標準曲線Fig. 2.2 Standard curve of β-glucan.4.3 兩株灰樹花菌體多糖和β-葡聚糖產(chǎn)量的比較灰樹花菌絲體多糖和β-葡聚糖的產(chǎn)量不僅與培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件和刺激物，而且還與灰樹花菌種緊密相關(guān)。通過實驗對比灰樹花菌 1、2 的菌絲體多β-葡聚糖的含量，選出產(chǎn)β-葡聚糖的較優(yōu)菌株，以便后期作進一步研究。結(jié)圖 2.3 所示。1.21.41.61.8得率/(mg·g-1)β-葡聚糖得率總多糖得率糖得率/％4.44.64.85.0
【學位授予單位】：貴州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：TQ929

【參考文獻】

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本文編號：2683391