本文關(guān)鍵詞：小鼠β-actin基因的RT-PCR克隆與真核表達(dá)

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【摘要】：以Trizol-異丙醇法提取小鼠肝臟總RNA,根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中小鼠β-actin基因序列設(shè)計(jì)引物,采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增小鼠β-actin基因編碼區(qū)并測(cè)序;以pcDNA3.1-flag為載體,構(gòu)建β-actin基因真核表達(dá)質(zhì)粒,繼而將其重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)染于HeLa細(xì)胞,采用Western blot印跡法鑒定重組蛋白pcDNA3.1-flag/β-actin的表達(dá)水平。結(jié)果表明:克隆獲得的289 bp片段與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中β-actin基因序列完全吻合,并且成功構(gòu)建的pcDNA3.1-flag/β-actin真核基因表達(dá)載體,其重組質(zhì)粒可在HeLa細(xì)胞中有效表達(dá)約43×10~3KD融合蛋白。
【作者單位】： 遼東學(xué)院農(nóng)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 小鼠 β-actin基因 RT-PCR 克隆 真核表達(dá)
【分類(lèi)號(hào)】：Q78
【正文快照】： β-actin基因編碼肌動(dòng)蛋白,微絲的主要蛋白質(zhì)成分,具收縮功能,廣泛分布。由于β-actin基因在各組織細(xì)胞中的表達(dá)水平相對(duì)恒定,故檢測(cè)基因表達(dá)水平時(shí),常作為相對(duì)定量分析的參照,而被公認(rèn)為內(nèi)參基因[1],亦稱(chēng)“管家基因”[2]。β-ac-tin蛋白表達(dá)水平通常恒定[3],常作為Western bl

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張杰;彭勝民;周波;戰(zhàn)晴晴;張榮沭;馬鳳鳴;;RT-PCR克隆甜菜硝酸還原酶cDNA全長(zhǎng)序列及分析[J];植物研究;2008年04期

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本文編號(hào)：991996