本文關(guān)鍵詞：丹參水楊酸結(jié)合蛋白基因的克隆、表達(dá)分析

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【摘要】：[目的]從丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)培養(yǎng)細(xì)胞中克隆水楊酸結(jié)合蛋白(salicylic acid binding protein 2,SABP2)基因Sm SABP2并對其進(jìn)行表達(dá)分析。[方法]用Trizol法提取丹參細(xì)胞總RNA,反轉(zhuǎn)錄得到c DNA,通過PCR擴(kuò)增Sm SABP2,將其連接到p MD-19T simple載體中,利用酶切連接的方法構(gòu)建p ET28a-Sm SABP2原核表達(dá)載體,再轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行表達(dá),檢測蛋白酯酶活性。利用RT-q PCR測定水楊酸處理2 h的丹參懸浮細(xì)胞中Sm SABP2的表達(dá)量。[結(jié)果]PCR擴(kuò)增獲得了長度為780 bp的Sm SABP2,成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體p ET28aSm SABP2,IPTG誘導(dǎo)得到了Sm SABP2,SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示誘導(dǎo)8 h優(yōu)于4 h,q PCR檢測發(fā)現(xiàn)水楊酸處理2 h內(nèi)Sm SABP2相對表達(dá)量持續(xù)升高。[結(jié)論]從丹參培養(yǎng)細(xì)胞中克隆了大小為780 bp的Sm SABP2,成功表達(dá)出了有活性的Sm SABP2,并且該基因能夠強(qiáng)烈響應(yīng)水楊酸誘導(dǎo)。
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 丹參 基因克隆 SmSABP 原核表達(dá) qPCR
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31670301;No.31170274) 國家級創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.201610712080)
【分類號】：S567.53;Q943.2
【正文快照】： 水楊酸(salicylic acid,SA)是廣泛存在于植物體內(nèi)參與調(diào)控其生長、發(fā)育過程的植物新內(nèi)源激素[1],也是能夠激活植物系統(tǒng)獲得性抗性(systemic ac-quired resistance,SAR)和過敏反應(yīng)(hypersensitiveresponse,HR)的重要內(nèi)源信號分子[2]。SA作為一個關(guān)鍵信號分子在植物受到病原菌侵

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本文編號：991915