本文關(guān)鍵詞：雞胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)為雄性生殖細(xì)胞及轉(zhuǎn)基因雞的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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雞胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)為雄性生殖細(xì)胞及轉(zhuǎn)基因雞的制備

     論文目錄

摘要第1-7頁

ABSTRACT第7-11頁

縮略詞表第11-17頁

第一章 文獻(xiàn)綜述第17-41頁

 1 胚胎干細(xì)胞第17-19頁

   ·胚胎干細(xì)胞鑒定第17-18頁

     ·細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定第17頁

     ·堿性磷酸酶活性(AKP)和胚胎階段特異性表面抗原(SSEA-1)鑒定第17-18頁

   ·胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)第18-19頁

   ·胚胎干細(xì)胞的應(yīng)用第19頁

 2 生殖細(xì)胞第19-22頁

   ·精原干細(xì)胞特性第20頁

   ·精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)第20-21頁

   ·精原干細(xì)胞的應(yīng)用第21-22頁

     ·轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)第21頁

     ·臨床應(yīng)用第21-22頁

 3 ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化為雄性生殖細(xì)胞第22-30頁

   ·影響ES分化為雄性生殖細(xì)胞的因素第22-26頁

     ·內(nèi)源性因素第22-25頁

     ·外源性因素第25-26頁

   ·ES向生殖細(xì)胞方向分化的誘導(dǎo)方法第26-28頁

     ·改變細(xì)胞的培養(yǎng)條件第26-28頁

     ·導(dǎo)入外源性基因第28頁

     ·體內(nèi)誘導(dǎo)第28頁

   ·ES向生殖細(xì)胞方向分化的研究進(jìn)展第28-29頁

   ·體外誘導(dǎo)ES分化為生殖細(xì)胞的應(yīng)用前景第29-30頁

 4 本研究的目的和意義第30-31頁

 5 參考文獻(xiàn)第31-41頁

第二章 雞胚ESC和SSCs形態(tài)學(xué)及差異蛋白標(biāo)記的比較第41-58頁

 1 材料與方法第42-48頁

   ·實(shí)驗(yàn)材料第42頁

   ·試劑第42頁

   ·雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)制備第42頁

   ·雞胚成纖維細(xì)胞傳代第42-43頁

   ·雞胚成纖維細(xì)胞凍存第43頁

   ·雞胚成纖維細(xì)胞解凍第43頁

   ·飼養(yǎng)層的制備第43頁

   ·獲取雞ES細(xì)胞和SSCs細(xì)胞第43-44頁

     ·ES細(xì)胞的培養(yǎng)及傳代第43-44頁

     ·SSCs細(xì)胞的培養(yǎng)及傳代第44頁

   ·堿性磷酸酶活性(AKP)活性鑒定第44頁

   ·胚胎階段特異性表面抗原(SSEA-1)免疫熒光鑒定第44頁

   ·細(xì)胞RNA提取第44-45頁

   ·Reverse Transcription-PCR(RT-PCR)檢測(cè)第45-46頁

   ·免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)第46-47頁

   ·Western blot檢測(cè)第47-48頁

 2 結(jié)果第48-52頁

   ·ES細(xì)胞和SSCs細(xì)胞形態(tài)比較第48-49頁

   ·ES和SSCs細(xì)胞未分化狀態(tài)檢測(cè)第49-50頁

   ·ES和SSCs細(xì)胞mRNA水平上差異比較結(jié)果第50-51頁

   ·ES和SSCs細(xì)胞蛋白水平上差異比較結(jié)果第51-52頁

 3 討論第52-54頁

 4 參考文獻(xiàn)第54-58頁

第三章 視黃酸對(duì)雞ESC向雄性生殖細(xì)胞分化的影響第58-71頁

 1 材料和方法第58-62頁

   ·實(shí)驗(yàn)材料第58頁

   ·主要儀器和設(shè)備第58頁

   ·主要試劑第58頁

   ·ES細(xì)胞性別鑒定第58-59頁

   ·篩選適宜視黃酸濃度第59-60頁

   ·適宜濃度誘導(dǎo)ES細(xì)胞向生殖細(xì)胞方向分化第60頁

   ·熒光定量PCR檢測(cè)特定基因的表達(dá)第60-62頁

   ·免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)第62頁

 2 結(jié)果第62-66頁

   ·雄性ES細(xì)胞篩選第62-63頁

   ·不同濃度誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化第63頁

   ·半定量PCR檢測(cè)不同濃度誘導(dǎo)后相關(guān)基因表達(dá)情況第63頁

   ·ES自分化實(shí)驗(yàn)組第63-64頁

   ·免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果第64頁

   ·適宜視黃酸濃度誘導(dǎo)ES細(xì)胞形態(tài)變化第64頁

   ·熒光定量PCR檢測(cè)RA誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組基因變化結(jié)果第64-65頁

   ·免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果第65-66頁

 3 討論第66-67頁

 4 參考文獻(xiàn)第67-71頁

第四章 不同基質(zhì)蛋白對(duì)ESC向雄性生殖細(xì)胞方向分化的影響第71-83頁

 1 材料和方法第71-72頁

   ·實(shí)驗(yàn)材料第71頁

   ·主要儀器和設(shè)備第71頁

   ·主要試劑第71-72頁

   ·篩選雄性ES細(xì)胞第72頁

   ·基質(zhì)蛋白包被及雄性ES細(xì)胞接種培養(yǎng)第72頁

   ·熒光定量PCR檢測(cè)特定基因的表達(dá)第72頁

   ·免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)第72頁

 2 結(jié)果第72-76頁

   ·細(xì)胞形態(tài)變化第72-73頁

   ·不同基質(zhì)蛋白誘導(dǎo)后熒光定量檢測(cè)基因表達(dá)情況第73-75頁

   ·免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果第75-76頁

 3 討論第76-80頁

 4 參考文獻(xiàn)第80-83頁

第五章 睪丸支持細(xì)胞、睪丸提取液及綜合因素對(duì)ESC向雄性生殖細(xì)胞分化的影響第83-104頁

 1 材料和方法第83-88頁

   ·實(shí)驗(yàn)材料第83-84頁

   ·主要儀器和設(shè)備第84頁

   ·主要試劑第84頁

   ·睪丸支持細(xì)胞原代分離第84頁

   ·支持細(xì)胞傳代第84頁

   ·雞胚支持細(xì)胞凍存第84-85頁

   ·雞胚支持細(xì)胞解凍第85頁

   ·支持細(xì)胞鑒定第85-86頁

     ·油紅染色第85頁

     ·支持細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的檢測(cè)第85-86頁

   ·絲裂霉素-C處理第86頁

   ·支持細(xì)胞與雄性ES細(xì)胞共培養(yǎng)第86-87頁

   ·不同時(shí)期睪丸組織提取液制備第87頁

   ·不同時(shí)期睪丸組織條件培養(yǎng)基提取第87頁

   ·睪丸組織提取液和條件培養(yǎng)基共同誘導(dǎo)ES細(xì)胞第87-88頁

   ·綜合因素誘導(dǎo)組第88頁

 2 結(jié)果第88-98頁

   ·支持細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察第88頁

   ·油紅O染色第88頁

   ·雞胚支持細(xì)胞RT-PCR鑒定第88-89頁

   ·支持細(xì)胞和ES細(xì)胞共培養(yǎng)后細(xì)胞形態(tài)變化第89-90頁

   ·誘導(dǎo)后熒光定量檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)情況第90頁

   ·免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)特定蛋白表達(dá)情況第90-91頁

   ·不同時(shí)期睪丸組織提取液誘導(dǎo)組第91-93頁

   ·不同時(shí)期睪丸組織條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)組第93-96頁

   ·綜合因素誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組結(jié)果第96-98頁

 3 討論第98-101頁

 4 參考文獻(xiàn)第101-104頁

第六章 SSCs體內(nèi)介導(dǎo)法制備抗病轉(zhuǎn)基因雞第104-114頁

 1 材料與方法第104-106頁

   ·試驗(yàn)材料第104頁

   ·睪丸注射第104-105頁

   ·睪丸冰凍切片檢測(cè)第105頁

   ·人工授精第105頁

   ·PCR檢測(cè)第105-106頁

     ·引物設(shè)計(jì)及合成第105頁

     ·PCR擴(kuò)增檢測(cè)第105-106頁

   ·睪丸組織基因組dot blotting檢測(cè)第106頁

   ·RT-PCR檢測(cè)EGFP-MMx基因的表達(dá)情況第106頁

   ·Western blot檢測(cè)EGFP-MMx融合蛋白的表達(dá)第106頁

 2 結(jié)果第106-111頁

   ·睪丸冰凍切片檢測(cè)第107頁

   ·睪丸組織基因組PCR結(jié)果第107-108頁

   ·睪丸組織基因組dot blotting檢測(cè)第108頁

   ·精液品質(zhì)檢測(cè)第108-109頁

   ·精液PCR檢測(cè)結(jié)果第109頁

   ·F1代胚胎熒光檢測(cè)結(jié)果第109頁

   ·血液PCR檢測(cè)結(jié)果第109-110頁

   ·RT-PCR檢測(cè)EGFP-MMx基因的表達(dá)結(jié)果第110頁

   ·Western blot檢測(cè)結(jié)果第110-111頁

 3 討論第111-112頁

 4 參考文獻(xiàn)第112-114頁

第七章 結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)第114-115頁

致謝第115-116頁

博士期間發(fā)表的論文第116-117頁

論文編號(hào)BS1893027，這篇論文共117頁
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