發(fā)布時(shí)間：2017-09-24 19:42

  本文關(guān)鍵詞：桂糖11號(hào)Rubisco基因克隆、原核表達(dá)及純化

  更多相關(guān)文章： 甘蔗 -二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco) 克隆 原核表達(dá) 融合蛋白 純化

【摘要】：【目的】通過(guò)原核表達(dá)及純化獲得甘蔗1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)的大、小亞基融合蛋白,為獲得符合抗體制備條件的高純度融合蛋白提供技術(shù)支持�！痉椒ā恳愿收崞贩N桂糖11號(hào)(GT11)+1葉為材料,根據(jù)NCBI公布的甘蔗Rubisco大、小亞基基因(rbc L和rbc S)的編碼域序列(CDS)設(shè)計(jì)特異性引物,PCR擴(kuò)增rbc L和rbc S基因的CDS,然后連接至原核表達(dá)載體p ET-30a(+),構(gòu)建重組質(zhì)粒后轉(zhuǎn)入原核細(xì)胞(大腸桿菌Rosetta)中誘導(dǎo)表達(dá),用鎳親和層析柱對(duì)融合蛋白進(jìn)行純化,并比較分析桂糖11號(hào)與其他甘蔗品種在rbc L和rbc S基因的CDS及編碼蛋白序列方面的差異。【結(jié)果】rbc L和rbc S基因的CDS長(zhǎng)度分別為1431和510 bp,其中桂糖11號(hào)rbc L基因的CDS與Saccharum hybrid cultivar SP80-3280(Gen Bank登錄號(hào)AE009947)、Saccharum hybrid cultivar Q155(Gen Bank登錄號(hào)KU214867)的一致,桂糖11號(hào)rbc S基因的CDS與Saccharum hybrid cultivar GT28(Gen Bank登錄號(hào)JN591757)的存在7個(gè)堿基差異,但僅有2個(gè)氨基酸發(fā)生錯(cuò)義突變。Rbc L和Rbc S融合蛋白以包涵體形式存在原核細(xì)胞中,用鎳離子親和層析純化及超濾濃縮后其濃度均在1.0 mg/m L以上�！窘Y(jié)論】從桂糖11號(hào)成功克隆Rubisco大亞基和小亞基基因的CDS,大亞基基因的CDS比小亞基的保守性更高,且均可在原核細(xì)胞中高度表達(dá),經(jīng)純化濃縮獲得的高純度融合蛋白可用于制備Rubisco單克隆抗體。
【作者單位】： 廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院/亞熱帶農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;玉林師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究所/中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究中心/農(nóng)業(yè)部廣西甘蔗生物技術(shù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣西甘蔗遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 甘蔗 -二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco) 克隆 原核表達(dá) 融合蛋白 純化
【基金】：國(guó)家“863”計(jì)劃項(xiàng)目(2013AA102604) 廣西八桂學(xué)者和特聘專(zhuān)家專(zhuān)項(xiàng)基金項(xiàng)目(廳發(fā)[2013]3號(hào))
【分類(lèi)號(hào)】：S566.1
【正文快照】： (1Agricultural College,Guangxi University/State Key Laoratory of Conservation and Utilization of SubtropicalAgrobioresources,Nanning 530005,China;2Sugarcane Research Institute,Guangxi Academy of Agricultural Sciences/Sugarcane Research Center,Chinese Aca

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 崔喜艷;董雅致;劉曉慶;張治安;;栽培大豆Rubisco小亞基基因(rbcS)全長(zhǎng)cDNA的克隆及原核表達(dá)[J];中國(guó)油料作物學(xué)報(bào);2014年03期

2 謝翎;陳紅梅;尹，

本文編號(hào)：913133