本文關(guān)鍵詞：豬病毒性腹瀉檢測(cè)基因芯片的兩種樣品標(biāo)記技術(shù)比較

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【摘要】：對(duì)豬病毒性腹瀉檢測(cè)芯片的兩種樣品標(biāo)記方法進(jìn)行比較。分別選取豬流行性腹瀉病毒(PEDV)的S和M基因,豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)的N和S基因,A型豬輪狀病毒(GAR)的VP7和NSP4基因設(shè)計(jì)引物,用PCR擴(kuò)增制備靶基因,純化后制備豬病毒性腹瀉聯(lián)合檢測(cè)基因芯片。提取樣品核酸,采用Cy3直接標(biāo)記法和間接標(biāo)記法進(jìn)行PCR擴(kuò)增標(biāo)記,標(biāo)記的樣品再與芯片雜交、掃描和數(shù)據(jù)分析,同時(shí)對(duì)兩種標(biāo)記方法的特異性、敏感性等進(jìn)行了比較。結(jié)果表明,兩種方法標(biāo)記的樣品均能與基因芯片特異性雜交,但直接法的中位信號(hào)值(median)均高于間接法的中位信號(hào)值,直接法的芯片雜交信噪比是用間接法的5倍以上。兩種標(biāo)記方法制備樣品特異性好,豬藍(lán)耳病毒、豬瘟病毒、豬乙型腦炎病毒、豬偽狂犬病毒驗(yàn)證檢測(cè)為陰性;直接法和間接法的最低檢測(cè)濃度分別為10~5和10~7 copies·μL~(-1),前者的靈敏性是后者的100倍。應(yīng)用優(yōu)化的直接標(biāo)記法處理56份臨床樣品,進(jìn)行芯片的檢測(cè)應(yīng)用,結(jié)果與RT-PCR一致。本研究結(jié)果表明直接法熒光標(biāo)記樣品可明顯提高病毒性腹瀉檢測(cè)芯片的檢測(cè)效果。
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院豬病研究中心與基因芯片實(shí)驗(yàn)室;四川省崇州市農(nóng)村發(fā)展局;
【關(guān)鍵詞】： 豬腹瀉病毒 基因芯片 直接標(biāo)記 間接標(biāo)記 比較
【基金】：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)項(xiàng)目(201203056)
【分類(lèi)號(hào)】：S858.28
【正文快照】： 豬流行性腹瀉病(porcine epidemic diarrhea,PED)、豬傳染性胃腸炎(transmissible gastroenteri-tis of swine,TGE)和A型豬輪狀病毒病(group Aporcine rotavirus,GAR)是分別由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)以及A型豬輪狀病毒(GAR)引起的一類(lèi)高度接觸性腸

【相似文獻(xiàn)】

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