本文關(guān)鍵詞：3株放線菌新物種多相分類與易變鏈霉菌TRM45540 ActD-24基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建

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【摘要】：新疆南部地區(qū)日照時(shí)間充足,降水量少,氣候干燥,形成了典型的鹽堿極端環(huán)境,在該環(huán)境中蘊(yùn)藏著豐富的放線菌新物種。本研究對(duì)來自南疆鹽堿環(huán)境的三株放線菌新物種進(jìn)行了多相分類鑒定,確定其分類地位;同時(shí)本課題組從新疆羅布泊分離獲得一株高產(chǎn)放線菌素D的易變鏈霉菌TRM45540,利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)了該菌株放線菌素D生物合成基因簇,推測(cè)其中的ActD-24基因這一膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能對(duì)放線菌素D生物合成起調(diào)控作用,然而尚未見相關(guān)報(bào)道。本研究構(gòu)建了易變鏈霉菌TRM45540放線菌素D生物合成基因簇ActD-24基因的重組質(zhì)粒,以期驗(yàn)證該基因的功能,確定其在放線菌素D生物合成途徑中的調(diào)控作用。具體研究結(jié)果如下:1.通過對(duì)菌株TRM46794-61、TRM49032和TRM49642基因型特征、形態(tài)特征、生理生化特征以及化學(xué)分類特征的多相分類,同時(shí)與相似菌株進(jìn)行比較分析證實(shí)了三株菌屬于鏈霉菌屬的新物種,依次命名為溝渠鏈霉菌(Streptomyces canalis sp.nov.),模式菌株為TRM46794-61T;戈壁灘鏈霉菌(Streptomyces gobiensis sp.nov.),模式菌株為TRM49032 T;若羌鏈霉菌(Streptomyces ruoqiangensis sp.nov.),模式菌株為TRM49642 T。2.利用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)的CD-Search功能預(yù)測(cè)ActD-24基因具有膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白保守結(jié)構(gòu)域序列;同時(shí)BLAST比對(duì)結(jié)果顯示ActD-24基因與Streptomyces lividans TK24的putative membrane protein序列最相似,相似度為87%,因此推測(cè)ActD-24基因具有編碼膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白功能。通過構(gòu)建pKC1139-T1KanT2突變載體驗(yàn)證ActD-24基因的功能。具體突變載體構(gòu)建過程:設(shè)計(jì)同源臂上游片段長(zhǎng)度為411 bp,下游片段為573 bp,標(biāo)記基因(kan)片段為1491 bp,并將三條目的片段通過酶連方式與穿梭載體pKC1139相連,獲得突變載體pKC1139-T1KanT2,大小約為9 kb。最終將突變載體轉(zhuǎn)入E.coli ET12567完成重組質(zhì)粒構(gòu)建。本研究對(duì)三株放線菌新物種的鑒定豐富了放線菌物種資源庫(kù);而ActD-24基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建為研究其在放線菌素D產(chǎn)生的調(diào)控作用提供了研究基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：放線菌 多相分類 放線菌素D 膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因 重組質(zhì)粒構(gòu)建
【學(xué)位授予單位】：塔里木大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q93;Q78
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第1章 文獻(xiàn)綜述9-17
• 1.1 放線菌系統(tǒng)分類學(xué)簡(jiǎn)介9-12
• 1.1.1 放線菌簡(jiǎn)介9
• 1.1.2 放線菌多相分類9-11
• 1.1.3 鏈霉菌屬分類特點(diǎn)11-12
• 1.2 放線菌素生物合成簡(jiǎn)介12-15
• 1.3 膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的調(diào)控作用15-16
• 1.4 研究目的及意義16
• 1.5 技術(shù)路線16-17
• 第2章 3 株放線菌新物種多相分類鑒定17-52
• 2.1 材料與方法17-29
• 2.1.1 主要試劑及儀器17-18
• 2.1.2 菌株來源、命名及保藏18
• 2.1.3 菌株基因型特征18-20
• 2.1.4 菌株形態(tài)特征20-21
• 2.1.5 菌株生理生化特征21-25
• 2.1.6 菌株化學(xué)分類特征25-29
• 2.2 結(jié)果與分析29-50
• 2.2.1 菌株TRM46794-61多相分類鑒定29-36
• 2.2.2 菌株TRM49032多相分類鑒定36-43
• 2.2.3 菌株TRM49642多相分類鑒定43-50
• 2.3 討論50-52
• 第3章 易變鏈霉菌TRM45540ActD-24基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建52-69
• 3.1 材料與方法52-61
• 3.1.1 主要試劑及儀器52-53
• 3.1.2 菌株與質(zhì)粒53
• 3.1.3 培養(yǎng)基及抗生素53-54
• 3.1.4 ActD-24基因功能預(yù)測(cè)54
• 3.1.5 菌株TRM45540抗性篩選54
• 3.1.6 引物設(shè)計(jì)及PCR擴(kuò)增54-55
• 3.1.7 ActD-24基因突變載體構(gòu)建55-60
• 3.1.8 重組質(zhì)粒構(gòu)建60-61
• 3.2 結(jié)果與分析61-68
• 3.2.1 ActD-24基因功能預(yù)測(cè)61-62
• 3.2.2 菌株TRM45540抗性篩選62
• 3.2.3 ActD-24基因突變載體構(gòu)建62-66
• 3.2.4 ActD-24基因重組質(zhì)粒驗(yàn)證66-68
• 3.3 討論68-69
• 第4章 總結(jié)與展望69-71
• 參考文獻(xiàn)71-76
• 致謝76-78
• 作者簡(jiǎn)介78

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