與甘蔗抗黑穗病性相關(guān)的14-3-3基因的克隆和表達(dá)分析
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【摘要】:為了解14-3-3基因在甘蔗黑穗病抗性中的作用,本研究以課題組前期構(gòu)建的甘蔗抗黑穗病抑制消減雜交文庫(kù)中篩選出的1個(gè)與14-3-3基因同源的EST序列作為探針,利用電子克隆和RT-PCR方法從甘蔗ROC22品種中分離到1個(gè)Sc14-3-3基因(Gen Bank Accession Number:KJ577592),并對(duì)其序列信息和基因表達(dá)情況進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,該基因ORF長(zhǎng)771 bp,編碼256個(gè)氨基酸殘基;Sc14-3-3是定位于細(xì)胞質(zhì)的親水蛋白,無跨膜螺旋區(qū)及信號(hào)肽,有10個(gè)Ser、3個(gè)Thr和7個(gè)Tyr潛在的磷酸化位點(diǎn),并在N-端有4個(gè)蛋白結(jié)合區(qū)和1個(gè)多核苷酸結(jié)合區(qū),對(duì)翻譯和能量新陳代謝起著重要作用;該蛋白屬非ε類群,其N-端和中間區(qū)域在不同物種間相對(duì)保守,C-端差異相對(duì)較大;虮磉_(dá)模式分析顯示,Sc14-3-3基因可能參與甘蔗對(duì)生物逆境的細(xì)胞免疫響應(yīng),其對(duì)Me JA介導(dǎo)的信號(hào)途徑應(yīng)答較SA和ABA早;黑穗病菌脅迫下,Sc14-3-3基因在甘蔗抗感品種中的表達(dá)模式存在差異,其在抗黑穗病品種YC05-179中上調(diào)表達(dá)且表達(dá)量變化明顯,揭示了該基因參與甘蔗對(duì)黑穗病的應(yīng)答反應(yīng)。以上結(jié)果為甘蔗Sc14-3-3基因的功能研究積累了一定的基礎(chǔ)資料,并為今后甘蔗的抗病分子育種提供后備基因資源。
【作者單位】: 福建農(nóng)林大學(xué)農(nóng)業(yè)部福建甘蔗生物學(xué)與遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家甘蔗產(chǎn)業(yè)技術(shù)研發(fā)中心;福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】: 甘蔗 --基因 生物信息學(xué) 熒光定量PCR
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31340060) 福建省杰出青年科學(xué)基金(No.2015J06006) 福建省高等學(xué)校新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃(No.JA14095) 農(nóng)業(yè)部甘蔗生物學(xué)與遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題(No.MOAFJSBGB-201501)
【分類號(hào)】:S435.661
【正文快照】: 1967年,Mooore等[1]在牛腦細(xì)胞中首次發(fā)現(xiàn)一種大小在25~32 ku之間的異源二聚體酸性可溶蛋白,根據(jù)二乙氨乙基纖維素柱(DEAE cellulose)層析分離出片段數(shù)及其在淀粉凝膠電泳上的遷移率,命名為14-3-3蛋白。在之后的很長(zhǎng)一段時(shí)間里,14-3-3蛋白被認(rèn)為是一種腦特異蛋白,直到它首次在
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