目的篩選與乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞遷移相關(guān)的目的基因,并探究沉默目的基因?qū)DA-MB-231細(xì)胞侵襲的影響,為尋求三陰性乳腺癌的治療靶點(diǎn)提出新的思路及切入點(diǎn)。方法1.首先針對20個待檢基因各設(shè)計3個RNA沉默靶點(diǎn),將攜帶不同沉默靶點(diǎn)的3個質(zhì)粒以單獨(dú)及等比例混合兩種方式進(jìn)行慢病毒包裝,感染MDA-MB-231細(xì)胞,分別稱為shRNA1、shRNA2、shRNA3以及shRNA。本實(shí)驗(yàn)同時設(shè)置陰性對照組(NC組)。2.利用高內(nèi)涵篩選劃痕實(shí)驗(yàn),通過Celigo系統(tǒng)收集細(xì)胞遷移圖像并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,比較各組細(xì)胞的劃痕愈傷能力。從20個待檢基因之中挑選出與細(xì)胞遷移有關(guān)的基因,稱為目的基因。3.通過蛋白質(zhì)免疫印跡法(western blot,WB)對目的基因的3個shRNA進(jìn)行蛋白表達(dá)情況的測定,選出沉默效率最好的一組繼續(xù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。4.應(yīng)用Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn),檢驗(yàn)?zāi)康幕虻南抡{(diào)對乳腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響。5.采用WB方法,檢測目的基因沉默后乳腺癌細(xì)胞中上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)相關(guān)蛋白的表達(dá)情況,從而進(jìn)一步...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1基因沉默對MDA-MB-231細(xì)胞遷移能力的影響

劃痕實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計圖，各組31細(xì)胞24h遷移面積變化(NC/實(shí)驗(yàn)組)；B.HCS劃痕實(shí)驗(yàn)代表圖，NC及目的基移圖。目的基因后CPNE1、KCTD14、FUNDC2蛋白表達(dá)較顯減少證目的基因的RNA沉默效率，并從3個shRNA中選取沉默效果最好們利用蛋白質(zhì)免....

圖2目的基因沉默對CPNE1、KCTD14、FUNDC2蛋白表達(dá)的影響

17圖2目的基因沉默對CPNE1、KCTD14、FUNDC2蛋白表達(dá)的影響注：Westernblot蛋白電泳圖，NC組及目的基因沉默組中CPNE1蛋白（圖A）、KCTD14蛋白（圖B）、FUNDC2蛋白（圖C）表達(dá)情況，以β-actin為內(nèi)參。4.3....

圖3CPNE1、KCTD14、FUNDC2低表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞侵襲能力影響

圖3CPNE1、KCTD14、FUNDC2低表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞侵襲能力影響注：顯微鏡下NC組及shCPNE1組（圖A）、shKCTD14組（圖B）、shFUNDC2組（圖侵襲細(xì)胞代表圖片（上），侵襲數(shù)目統(tǒng)計圖（下）。代表圖片放大倍數(shù)100X，標(biāo)尺100μ....

本文編號：3998948