本文關(guān)鍵詞：鯉魚2種脂蛋白脂肪酶基因的cDNA克隆、表達(dá)及其酶活性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了對鯉魚(Cyprinus carpio)2種脂蛋白脂肪酶(LPL1、LPL2)基因進(jìn)行c DNA克隆以及表達(dá)和酶活性分析,測定了鯉魚2種脂蛋白脂肪酶基因的組織表達(dá)特征,對這2種基因進(jìn)行了原核表達(dá),采用對硝基苯酚法比較了2種LPL的酶活性�？寺〗Y(jié)果表明,鯉魚LPL1和LPL2基因的開放閱讀框分別為1 524 bp和1 503 bp,分別編碼507個和500個氨基酸,氨基酸相似性為45.51%,LPL2氨基酸功能位點(diǎn)由~(83)N突變至~(83)K。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明:LPL1和LPL2均在肝臟中表達(dá)量最高,其次在心臟、脂肪、肌肉、腦、腎中,前腸表達(dá)量最低,在所有組織(器官)中LPL1的表達(dá)量比LPL2高。構(gòu)建的原核表達(dá)載體LPLs-p EASY(E2),經(jīng)IPTG誘導(dǎo),在Transetta(DE3)細(xì)胞中表達(dá)了分子量分別為5.55×10~4、5.35×10~4的融合蛋白LPL1和LPL2。酶活性測定結(jié)果表明:LPL1和LPL2酶活性最適溫度均為為35℃,最適p H均為8.0。LPL1酶活性高于LPL2,推測可能與LPL2的~(83)N位點(diǎn)突變所導(dǎo)致的N-糖基化位點(diǎn)缺失有關(guān)。〗
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無錫漁業(yè)學(xué)院;中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心農(nóng)業(yè)部淡水魚類遺傳育種和養(yǎng)殖生物學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 鯉魚 脂蛋白脂肪酶 基因克隆 原核表達(dá) 酶活性
【基金】：江蘇省水產(chǎn)三新工程項(xiàng)目(Y2015-4) 江蘇省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(BK20141096) 中央級基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(2015JBFM10)
【分類號】：S917.4
【正文快照】： gene cloning;prokaryotic expression;enzyme activity脂蛋白脂肪酶(LPL)是一種限速酶[1],水解血漿中乳糜微粒和極低密度脂蛋白中的甘油三酯[2],使機(jī)體能夠利用從食物中攝取以及肝臟中合成的脂肪,從而產(chǎn)生供組織利用的脂肪酸和單酰甘油,這一特性對于生物體能量代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

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3 楊宇虹;脂蛋白脂肪酶基因調(diào)節(jié)區(qū)和外顯子2～4的突變研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2003年

  本文關(guān)鍵詞：鯉魚2種脂蛋白脂肪酶基因的cDNA克隆、表達(dá)及其酶活性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：453460