發(fā)布時間：2017-06-15 15:06

  本文關(guān)鍵詞：山東省仔豬腹瀉相關(guān)病毒感染狀況調(diào)查及流行性腹瀉病毒S基因的遺傳進化分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：新生仔豬腹瀉是造成仔豬高死亡率及影響豬場生產(chǎn)成績和經(jīng)濟效益的重要因素,導(dǎo)致腹瀉的因素除飼養(yǎng)管理不良外,病原感染是最重要的影響因素。引起仔豬腹瀉的病原主要有兩類,即病毒和細菌。其中病毒性因素是當(dāng)前引起新生仔豬腹瀉的主要因素。臨床上仔豬病毒性腹瀉混合感染現(xiàn)象較為普遍,致腹瀉病毒的侵害部位、致病性質(zhì)、臨床癥狀及病理變化極為相似,很難單純依靠臨床癥狀及病理變化進行確診,給仔豬腹瀉病的診斷、防制工作帶來了極大的挑戰(zhàn)。為了明確山東省2014-2015年仔豬腹瀉相關(guān)病毒的感染狀況及發(fā)病規(guī)律,建立豬流行性腹瀉病毒防控技術(shù)。我們對山東省2014-2015年間部分仔豬腹瀉患病豬場的發(fā)病情況進行了調(diào)查分析,搜集了山東省多個地市的68份病情較重的仔豬腹瀉臨床病例,采集病料,對胃腸道組織學(xué)病變進行了觀察,利用RT-PCR/PCR技術(shù)及免疫組織化學(xué)方法進行了相關(guān)病毒檢測。結(jié)果表明,山東省仔豬腹瀉病的發(fā)病季節(jié)性越來越不明顯,由寒冷冬春季節(jié)多發(fā)轉(zhuǎn)變?yōu)樗募境０l(fā),并且發(fā)病日齡有擴大趨勢,病情也顯著加重,給仔豬病毒性腹瀉的防控帶來了更大的挑戰(zhàn)。流行毒株主要侵害以空腸為主的小腸段黏膜上皮細胞,腸道表現(xiàn)急性出血性壞死性炎癥。病毒檢測結(jié)果顯示,在68份病料中致腹瀉病毒的檢出率為88.24%(60/68),其中PEDV單獨感染致病的比例為82.35%(56/68),TGEV單獨感染并致病的比例為2.94%(2/68),腹瀉性病毒混合感染并致病的比例為2.94%(2/68),但沒有發(fā)現(xiàn)因PoRV單獨感染致病的病例。研究結(jié)果表明山東省新生仔豬腹瀉主要由病毒感染所致,以PEDV單獨感染為主,其中腹瀉性病毒混合感染的比例較低,TGEV單獨感染并致病的比例極低;PEDV已經(jīng)成為導(dǎo)致山東省豬場仔豬病毒性腹瀉的主要病原。為了進一步揭示PEDV的分子特征和分子流行病學(xué)規(guī)律,為防控PED提供理論依據(jù),對10株山東PEDV分離株的纖突蛋白基因(S)的全長進行序列測定及分析。結(jié)果表明10株P(guān)EDV的S基因全長為4161-4170nt,編碼1387-1390個氨基酸。同源性分析結(jié)果表明,10株山東分離株間的核苷酸同源性(97.9%-99.5%)和氨基酸同源性(96.9%-98.8%)較高;山東分離株與美國株MN及中國株KJL-2012的核苷酸同源性(98.2%-99.4%)和氨基酸同源性(97.8%-99.1%)較近,而與國內(nèi)早期分離的毒株CH/S(1986)、比利時株CV777及國內(nèi)使用的疫苗株CV777核苷酸同源性(93.4%-93.9%)和氨基酸同源性(92.2%-92.9%)較遠。氨基酸序列分析表明,新分離株與國內(nèi)使用的疫苗株CV777相比在多個位點氨基酸有特異的替換和插入,替換和插入的氨基酸與病毒的毒力及抗原性變化的關(guān)系尚需進一步研究�？偟膩碚f,山東省仔豬病毒性腹瀉的發(fā)病規(guī)律發(fā)生了明顯變化,引起病毒性腹瀉的病原主要是PEDV;且山東省PEDV的S基因與其他分離株相比具有獨特的分子特征,新分離株的毒力及現(xiàn)有疫苗對這些毒株的保護效果有待于進一步實驗研究。
【關(guān)鍵詞】：PEDV S基因 流行病學(xué) 遺傳距離 進化樹分析 抗原表位
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 符號及縮略詞說明4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-22
• 1.1 流行性腹瀉的概述11-13
• 1.1.1 PED的流行病學(xué)11-12
• 1.1.2 PED的臨床癥狀及剖檢變化12
• 1.1.3 PED的病理變化12-13
• 1.2 流行性腹瀉病毒13-14
• 1.2.1 PEDV的分類13
• 1.2.2 PEDV的形態(tài)結(jié)構(gòu)13
• 1.2.3 PEDV的理化特性13-14
• 1.2.4 PEDV的培養(yǎng)特性14
• 1.3 PEDV的分子生物學(xué)結(jié)構(gòu)14-17
• 1.3.1 PEDV的基因組結(jié)構(gòu)14-15
• 1.3.2 PEDV的主要基因及其產(chǎn)物15-17
• 1.3.2.1 S基因15-16
• 1.3.2.2 E基因16
• 1.3.2.3 M基因16
• 1.3.2.4 N基因16
• 1.3.2.5 ORF3基因16-17
• 1.4 PED檢測診斷技術(shù)17-19
• 1.4.1 RT-PCR方法17
• 1.4.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗17-18
• 1.4.3 免疫熒光技術(shù)18
• 1.4.4 膠體金技術(shù)18
• 1.4.5 血清中和實驗18-19
• 1.5 PED疫苗研究進展19-21
• 1.5.1 傳統(tǒng)疫苗19-20
• 1.5.2 基因工程疫苗20-21
• 1.6 本研究的目的和意義21-22
• 2 材料和方法22-45
• 2.1 實驗材料22-23
• 2.1.1 樣品及臨床信息22
• 2.1.2 實驗動物22
• 2.1.3 質(zhì)粒及受體細菌22-23
• 2.1.4 主要試劑23
• 2.1.5 主要設(shè)備及相關(guān)儀器23
• 2.2 實驗所用試劑配制方法23-26
• 2.3 2014年-2015年山東省仔豬腹瀉病毒感染狀況調(diào)查方法26-28
• 2.3.1 實驗樣品的處理26-27
• 2.3.2 病料RNA的提取27
• 2.3.3 腹瀉病毒RT-PCR的檢測方法27-28
• 2.4 PEDV病理組織學(xué)檢測28-30
• 2.5 針對PEDV N蛋白多克隆抗體的制備30-39
• 2.5.1 PEDV RNA的獲取30
• 2.5.2 目的基因（PEDV-N）的獲取30-31
• 2.5.3 PEDV N基因片段及PET-30a載體的雙酶切、純化回收及連接31-32
• 2.5.4 重組質(zhì)粒PET-30a-PEDVN的獲取及鑒定32-34
• 2.5.5 重組質(zhì)粒PET-30a-PEDVN在大腸桿菌（BL21）中的表達34-35
• 2.5.6 誘導(dǎo)產(chǎn)物的檢測35-37
• 2.5.7 蛋白質(zhì)純化37-39
• 2.6 免疫組織化學(xué)檢測39-40
• 2.7 PEDV流行毒株S基因遺傳變異分析40-45
• 2.7.1 引物設(shè)計40-41
• 2.7.2 樣品處理41
• 2.7.3 病料RNA的提取41
• 2.7.4 PEDV S基因的擴增41-45
• 3 結(jié)果與分析45-60
• 3.1 2014年-2015年山東省仔豬腹瀉病毒感染狀況調(diào)查45-46
• 3.1.1 仔豬腹瀉病毒檢測結(jié)果45-46
• 3.2 腹瀉仔豬組織病理學(xué)檢測結(jié)果46-47
• 3.3 多克隆抗體制備實驗結(jié)果47-51
• 3.3.1 PEDV N基因擴增結(jié)果47
• 3.3.2 重組質(zhì)粒的鑒定結(jié)果47-51
• 3.4 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果51-52
• 3.5 PEDV流行毒株S基因遺傳變異分析52-60
• 3.5.1 PEDV S基因目的基因擴增結(jié)果52
• 3.5.2 重組質(zhì)粒鑒定結(jié)果52-53
• 3.5.3 PEDV S基因序列分析53-55
• 3.5.4 PEDV S1蛋白抗原表位域及抗原表位分析55-56
• 3.5.5 PEDV S基因同源性比較56-58
• 3.5.6 PEDV S基因遺傳進化分析58-60
• 4 討論60-62
• 4.1 山東省仔豬腹瀉感染情況及流行規(guī)律60
• 4.2 PEDV S1蛋白抗原表位域及抗原表位分析60-61
• 4.3 PEDV S基因遺傳進化分析61-62
• 5 結(jié)論62-63
• 6 參考文獻63-68
• 7 附錄68-69
• 8 致謝69-71
• 9 碩士期間發(fā)表論文情況71

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4 杜曉莉;王一成;吳潤;徐麗華;袁秀芳;李軍星;周曉麗;;2010—2013年浙江省豬流行性腹瀉病毒臨床檢測及PEDV-S基因型分析[J];浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報;2014年03期

5 鄧祖麗穎;陳陸;;豬流行性腹瀉病毒巢式RT-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年01期

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9 ;Cloning the Structure Genes and Expression the N Gene of Porcine Epidemic Diarrhea Virus DX[J];Virologica Sinica;2009年03期

10 田克恭;;兔胸水滲出病[J];上海實驗動物科學(xué);1993年02期

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1 余麗蕓;侯喜林;;Development and Evalutaion of Enzyme-Linked mmunosorbent Assay Based on Recombinant Nucleocapsid Protein for Detection of Porcine Epidemic Diarrhea (PEDV) Antibodies[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

2 王金洛;宋維平;徐福洲;楊兵;賴平安;王琴;孟燕妮;;抗豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體(PEDV-IgY)及其特性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2003年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2003年

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5 鄭逢梅;趙軍;霍金耀;李歡;楊霞;常洪濤;杜季梅;王曉夢;王川慶;;PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表達及ELISA方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

6 ;Identification of two novel B cell epitopes on porcine epidemic diarrhea virus spike protein[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

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8 趙洲;豬流行性腹瀉病毒SC-P株生產(chǎn)用種用特性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

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