本文關鍵詞：PHLPP2基因小干擾RNA慢病毒載體的構建及對舌癌細胞Tca8113增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目前,口腔癌中發(fā)病率最高的是舌癌,舌癌有很高的惡性程度,早期即可檢測到淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,術后較易復發(fā)且生存質(zhì)量較差,往往對患者的生命造成很大的威脅。近年來,由于人類對舌癌越來越重視,使其各項研究方面都取得了一定的成果,但舌癌患者的5年生存率一直停滯中間偏下水平上,主要由于早期特異性生物學標志物的缺乏及舌癌易轉(zhuǎn)移復發(fā)等原因?qū)е�。由于舌是人體一個重要的功能器官,因此,如何延長舌癌患者的生存壽命,提高患者術后的生存質(zhì)量,是舌癌探索方面的研究重點。PHLPP是一種蛋白激酶,具有抑制惡性腫瘤形成的功能,是一個典型的抑癌基因。當PHLPP被激活時,PHLPP對蛋白磷酸酶Akt發(fā)生去磷酸化作用,導致細胞內(nèi)某些信號通路的傳導受影響。PHLPP2是PHLPP的一種異構體,其缺失與許多疾病有關,尤其在一些惡性腫瘤中,若PHLPP2發(fā)生了不同程度的缺失,會造成惡性腫瘤細胞增殖的增加,細胞凋亡的減少,但是PHLPP2在惡性腫瘤細胞是如何發(fā)揮作用并不十分明了,特別是在舌癌中的具體機制仍需繼續(xù)研究。細胞內(nèi)有一個重要的通路是磷脂酰肌醇-3-激酶/絲蘇氨酸蛋白激酶(phosphatidyl-inositol3-kinase/serine-threonine kinase,PI3K/AKT)信號傳導通路,其主要是通過激活Akt影響下游多種效應分子的活化狀態(tài)發(fā)揮作用。Akt是該通路的中心環(huán)節(jié),在該信號通路中作用舉足輕重,影響細胞的各個功能,與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展緊密相關。Akt的致癌作用主要與其Ser 473位點上磷酸化相關,有研究表明Akt活性在惡性腫瘤細胞的增殖、轉(zhuǎn)移及對放化療拮抗中所起的作用都非常關鍵。本次實驗在不同水平上研究了PHLPP2及Akt Ser473在舌癌中的作用,并得到了一些有意義的結(jié)果,對舌癌的發(fā)生發(fā)展進行了一些有益的探索。本實驗首先構建穩(wěn)定表達PHLPP2 sh RNA的Tca8113細胞系,研究敲低PHLPP2對Akt Ser473磷酸化水平和Tca8113細胞生長的影響。利用RNAi干擾技術,設計并合成針對PHLPP2基因的sh RNA,并將其克隆到sh RNA表達載體PSIH-H1上。經(jīng)測序成功后,包裝病毒并感染舌癌細胞Tca8113,建立敲低PHLPP2的穩(wěn)定細胞株。通過實時定量PCR和Western blot實驗檢驗RNAi的干擾效果。利用Western blot實驗和細胞生長曲線檢測敲低PHLPP2對Akt Ser473磷酸化及細胞生長的影響。經(jīng)測序證明,成功構建PHLPP2 sh RNA真核表達載體。實時定量PCR和Western blot實驗證明,構建的sh RNA能有效的抑制PHLPP2的表達,并構建敲低PHLPP2基因的Tca8113穩(wěn)定細胞系。實驗表明,敲低PHLPP2可促進細胞的生長并升高Akt Ser473的磷酸化水平。成功構建PHLPP2基因的sh RNA真核表達載體,轉(zhuǎn)染細胞后能有效地抑制PHLPP2基因的表達,且能升高Akt Ser473的磷酸化水平并促進細胞的生長,為進一步研究PHLPP2在舌癌中的功能及機制奠定基礎。
【關鍵詞】：PHLPP2 舌癌 Akt Ser473
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.8
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-17
• 2 材料和方法17-24
• 3 結(jié)果24-27
• 4 討論27-28
• 5 結(jié)論28-30
• 6 參考文獻30-36
• 7 附錄36-37
• 8 致謝37-38
• 綜述 舌癌的研究現(xiàn)狀38-48
• 參考文獻46-48

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 魯慧英;Detection of hepatitis C virus RNA sequences in cholangiocarcinomas in Chinese and American patients[J];Chinese Medical Journal;2000年12期

2 ;Detection the HCV RNA by PCR-microplate hybridization method from clinical specimens[J];中國輸血雜志;2001年S1期

3 付漢江,鄭曉飛;類mRNA RNA研究進展[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);2002年04期

4 Verheyden B ,徐其武;口服脊髓灰質(zhì)炎疫苗核殼和RNA的穩(wěn)定性[J];國外醫(yī)學.預防.診斷.治療用生物制品分冊;2002年01期

5 CMBE譯文組;探索小RNA的功能[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學生物工程學雜志;2004年03期

6 沈維干;RNA interference and its current application in mammals[J];Chinese Medical Journal;2004年07期

7 ;Potent and specific inhibition of SARS-CoV antigen expression by RNA interference[J];Chinese Medical Journal;2005年09期

8 孫娣;汪洋;張麗娟;閆玉清;;一種簡捷提取植物總RNA的方法[J];黑龍江醫(yī)藥;2005年06期

9 熊慧華;于世英;胡廣原;莊亮;;Effects of Survivin Expression Suppressed by Short Hairpin RNA on MCF-7 Cells[J];華中科技大學學報(醫(yī)學英德文版);2006年03期

10 楊益超;;RNA干擾及其在醫(yī)學中的應用[J];廣西醫(yī)學;2007年10期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 金由辛;;面向21世紀的RNA研究[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

2 ;第四屆RNA全國研討會大會報告日程安排[A];第四屆全國RNA進展研討會論文集[C];2005年

3 ;Function of Transfer RNA Modifications in Plant Development[A];植物分子生物學與現(xiàn)代農(nóng)業(yè)——全國植物生物學研討會論文摘要集[C];2010年

4 王峰;張秋平;陳金湘;;棉花總RNA的快速提取方法[A];中國棉花學會2011年年會論文匯編[C];2011年

5 關力;陳本iY;iJ云虹;郭培芝;魏重琴;邱蘇吾;苗健;;關于動物}D~T中RNAn,定方法的研究[A];中國生理科學會學術會議論文摘要匯編（生物化學）[C];1964年

6 夏海濱;;小RNA在免疫學領域中的應用研究進展[A];中國免疫學會第五屆全國代表大會暨學術會議論文摘要[C];2006年

7 ;The stability of hepatitis C virus RNA in various handling and storage conditions[A];中國輸血協(xié)會第四屆輸血大會論文集[C];2006年

8 郭德銀;;RNA干擾在病毒研究和控制中的應用[A];2006中國微生物學會第九次全國會員代表大會暨學術年會論文摘要集[C];2006年

9 甘儀梅;楊業(yè)華;王學奎;曹燕;楊特武;;棉花總RNA快速提取[A];中國棉花學會2007年年會論文匯編[C];2007年

10 ;Identification and characterization of novel interactive partner proteins for PCBP1 that is a RNA-binding protein[A];中國優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會第四屆全國學術論文報告會暨基因科學高峰論壇論文專輯[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 馮衛(wèi)東;研究人員發(fā)現(xiàn)可破壞腫瘤抑制基因的小RNA[N];科技日報;2009年

2 記者 儲笑抒 通訊員 盛偉;人體微小RNA有望提前發(fā)出癌癥預警[N];南京日報;2011年

3 瀘州醫(yī)學院副教授、科普作家 周志遠;“大頭兒子”與環(huán)狀RNA[N];第一財經(jīng)日報;2014年

4 麥迪信;小分子RNA可能有大作用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

5 董映璧;美發(fā)現(xiàn)基因調(diào)控可回應“RNA世界”[N];科技日報;2006年

6 張忠霞;特制RNA輕推一下,就能“喚醒”基因[N];新華每日電訊;2007年

7 聶翠蓉;RNA：縱是配角也精彩[N];科技日報;2009年

8 馮衛(wèi)東;RNA干擾機制首次在人體中獲得證實[N];科技日報;2010年

9 馮衛(wèi)東　王小龍;英在地球早期環(huán)境模擬條件下合成類RNA[N];科技日報;2009年

10 記者 常麗君;新技術讓研究進入單細胞內(nèi)RNA的世界[N];科技日報;2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王趙瑋;昆蟲RNA病毒復制及昆蟲抗病毒天然免疫機制研究[D];武漢大學;2014年

2 包純;一類新非編碼RNA的發(fā)現(xiàn)以及產(chǎn)生和功能的初探[D];華中師范大學;2015年

3 李語麗;基于MeRIP-seq的水稻RNA m6A甲基化修飾的研究[D];中國科學院北京基因組研究所;2015年

4 熊瑜琳;miR-122靶位基因STAT3調(diào)控長鏈非編碼 RNA Lethe促進HCV復制的機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

5 范春節(jié);高通量測序鑒定毛竹小RNA及其功能分析[D];中國林業(yè)科學研究院;2012年

6 王加強;小鼠著床前胚胎特異ERV相關長非編碼RNA的定向篩選及功能研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2015年

7 王業(yè)偉;非編碼RNA SPIU的結(jié)構和功能研究和p19INK4D在APL發(fā)病中的作用[D];上海交通大學;2013年

8 鄒艷芬;子癇前期中非編碼RNA對滋養(yǎng)細胞功能的調(diào)控及機制探索[D];南京醫(yī)科大學;2015年

9 朱喬;miR-10b在人肝細胞肝癌發(fā)生中的作用及其機制的初步探索[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

10 蔣俊鋒;長鏈非編碼RNA BACE1-AS促進Aβ聚集及其調(diào)節(jié)BACE1和SERF1a的ceRNA機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陸聰兒;條紋斑竹鯊再生肝臟中差異RNA的研究[D];浙江理工大學;2015年

2 張曉輝;小鼠幾種長鏈非編碼RNA基因功能的初步研究[D];昆明理工大學;2015年

3 全弘揚;長鏈非編碼RNA在細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應中的相關作用及機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

4 胡亮;DDX19A識別PRRSV基因組RNA并激活NLRP3炎癥小體[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

5 張帥兵;應用RNA干擾技術對旋毛蟲Nudix水解酶基因功能的研究[D];鄭州大學;2015年

6 鄭芳芳;肺癌RNA-Seq數(shù)據(jù)中RNA編輯事件的識別算法和系統(tǒng)分析[D];蘇州大學;2015年

7 陳瑞東;長鏈非編碼RNA MEG3在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中作用的實驗研究[D];蘇州大學;2015年

8 劉駿武;線蟲和水稻中環(huán)狀RNA的預測及分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2015年

9 李猷;利用RNA干擾技術提高番茄抗TMV侵染能力的研究[D];牡丹江師范學院;2015年

10 吳術盛;SVCV感染EPC細胞microRNA表達譜的初步研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2015年

  本文關鍵詞：PHLPP2基因小干擾RNA慢病毒載體的構建及對舌癌細胞Tca8113增殖的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：452966