本文關(guān)鍵詞：PHLPP2基因小干擾RNA慢病毒載體的構(gòu)建及對(duì)舌癌細(xì)胞Tca8113增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目前,口腔癌中發(fā)病率最高的是舌癌,舌癌有很高的惡性程度,早期即可檢測(cè)到淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,術(shù)后較易復(fù)發(fā)且生存質(zhì)量較差,往往對(duì)患者的生命造成很大的威脅。近年來(lái),由于人類對(duì)舌癌越來(lái)越重視,使其各項(xiàng)研究方面都取得了一定的成果,但舌癌患者的5年生存率一直停滯中間偏下水平上,主要由于早期特異性生物學(xué)標(biāo)志物的缺乏及舌癌易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)等原因?qū)е�。由于舌是人體一個(gè)重要的功能器官,因此,如何延長(zhǎng)舌癌患者的生存壽命,提高患者術(shù)后的生存質(zhì)量,是舌癌探索方面的研究重點(diǎn)。PHLPP是一種蛋白激酶,具有抑制惡性腫瘤形成的功能,是一個(gè)典型的抑癌基因。當(dāng)PHLPP被激活時(shí),PHLPP對(duì)蛋白磷酸酶Akt發(fā)生去磷酸化作用,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)某些信號(hào)通路的傳導(dǎo)受影響。PHLPP2是PHLPP的一種異構(gòu)體,其缺失與許多疾病有關(guān),尤其在一些惡性腫瘤中,若PHLPP2發(fā)生了不同程度的缺失,會(huì)造成惡性腫瘤細(xì)胞增殖的增加,細(xì)胞凋亡的減少,但是PHLPP2在惡性腫瘤細(xì)胞是如何發(fā)揮作用并不十分明了,特別是在舌癌中的具體機(jī)制仍需繼續(xù)研究。細(xì)胞內(nèi)有一個(gè)重要的通路是磷脂酰肌醇-3-激酶/絲蘇氨酸蛋白激酶(phosphatidyl-inositol3-kinase/serine-threonine kinase,PI3K/AKT)信號(hào)傳導(dǎo)通路,其主要是通過(guò)激活A(yù)kt影響下游多種效應(yīng)分子的活化狀態(tài)發(fā)揮作用。Akt是該通路的中心環(huán)節(jié),在該信號(hào)通路中作用舉足輕重,影響細(xì)胞的各個(gè)功能,與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān)。Akt的致癌作用主要與其Ser 473位點(diǎn)上磷酸化相關(guān),有研究表明Akt活性在惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移及對(duì)放化療拮抗中所起的作用都非常關(guān)鍵。本次實(shí)驗(yàn)在不同水平上研究了PHLPP2及Akt Ser473在舌癌中的作用,并得到了一些有意義的結(jié)果,對(duì)舌癌的發(fā)生發(fā)展進(jìn)行了一些有益的探索。本實(shí)驗(yàn)首先構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)PHLPP2 sh RNA的Tca8113細(xì)胞系,研究敲低PHLPP2對(duì)Akt Ser473磷酸化水平和Tca8113細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。利用RNAi干擾技術(shù),設(shè)計(jì)并合成針對(duì)PHLPP2基因的sh RNA,并將其克隆到sh RNA表達(dá)載體PSIH-H1上。經(jīng)測(cè)序成功后,包裝病毒并感染舌癌細(xì)胞Tca8113,建立敲低PHLPP2的穩(wěn)定細(xì)胞株。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)RNAi的干擾效果。利用Western blot實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞生長(zhǎng)曲線檢測(cè)敲低PHLPP2對(duì)Akt Ser473磷酸化及細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。經(jīng)測(cè)序證明,成功構(gòu)建PHLPP2 sh RNA真核表達(dá)載體。實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)證明,構(gòu)建的sh RNA能有效的抑制PHLPP2的表達(dá),并構(gòu)建敲低PHLPP2基因的Tca8113穩(wěn)定細(xì)胞系。實(shí)驗(yàn)表明,敲低PHLPP2可促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)并升高Akt Ser473的磷酸化水平。成功構(gòu)建PHLPP2基因的sh RNA真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染細(xì)胞后能有效地抑制PHLPP2基因的表達(dá),且能升高Akt Ser473的磷酸化水平并促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng),為進(jìn)一步研究PHLPP2在舌癌中的功能及機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：PHLPP2 舌癌 Akt Ser473
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.8
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-17
• 2 材料和方法17-24
• 3 結(jié)果24-27
• 4 討論27-28
• 5 結(jié)論28-30
• 6 參考文獻(xiàn)30-36
• 7 附錄36-37
• 8 致謝37-38
• 綜述 舌癌的研究現(xiàn)狀38-48
• 參考文獻(xiàn)46-48

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本文編號(hào)：452966