本文關(guān)鍵詞：構(gòu)建攜帶人Sox2和EGFP基因慢病毒表達(dá)載體，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的為了研究宮頸癌的發(fā)病機(jī)制,構(gòu)建攜帶人Sox2基因和EGFP基因的慢病毒表達(dá)載體。方法使用限制性內(nèi)切酶Sac II酶切p Lenti-EF1a-Sox2-IRES-EGFP質(zhì)粒,回收線性片段并補(bǔ)平Sac II切口,然后Xba I酶切該線性片段,回收3.432kb目的片段便獲連接用Sox2-IRES-EGFP片段;Eco RI線性化p FUGW,然后用BKL試劑盒將酶切產(chǎn)物補(bǔ)平,然后繼續(xù)用Xba I酶切已線性化的p FUGW(Eco R I酶切位點(diǎn)已補(bǔ)平),獲得9.122kb和819bp片段,回收9.122kb目的片段以獲得連接用載體片段。最后使用DNA連接試劑盒(Ta Ka Ra)中的Solution I將連接用Sox2一IRES-EGFP(3.432kb)和連接用載體片段(9.122kb)連接,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化,次日挑選單菌落,提取質(zhì)粒行酶切鑒定。所構(gòu)建新載體命名為p FUSGW。獲p FUSGW載體后,按Invitrogen公司所推薦的標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行慢病毒包裝,然后確認(rèn)慢病毒是否成功生產(chǎn);使用攜帶Sox2和EGFP基因的慢病毒感染293FT細(xì)胞和宮頸癌細(xì)胞株CC-2、CC-3以建立相應(yīng)的病毒感染體系。結(jié)果經(jīng)酶切鑒定證實(shí)成功構(gòu)建p FUSGW,按標(biāo)準(zhǔn)程序生產(chǎn)的攜帶Sox2和EGFP基因的慢病毒上清可高效率感染宮頸癌細(xì)胞株CC-2、CC-3。結(jié)論成功構(gòu)建了攜帶人Sox2和EGFP基因的慢病毒表達(dá)載體p FUSGW,為宮頸癌發(fā)病機(jī)制的相關(guān)后續(xù)研究奠定良好的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科;西北工業(yè)大學(xué)醫(yī)院婦科;西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科;
【關(guān)鍵詞】： SOX EGFP 慢病毒載體
【基金】：陜西省教育廳自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2013JK0797)
【分類號(hào)】：R737.33
【正文快照】： 宮頸癌(cervical cancer,CC)是全球婦女第二高發(fā)惡性腫瘤,其發(fā)病率在發(fā)展中國(guó)家居首位,其發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段、多步驟的復(fù)雜過(guò)程,與高危型HPV病毒感染、不良性行為以及生物學(xué)因素密切相關(guān)。腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells,CSCs)理論認(rèn)為CSCs在CC的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)

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1 馬俐君;楊建民;周虹;胡曉霞;王健民;;逆病毒介導(dǎo)EGFP基因轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2009年01期

2 陳春林;葉劍;尹小磊;陳小t

本文編號(hào)：449269