本文關(guān)鍵詞：草魚unc45b基因的全長克隆、生物信息學分析及投喂蠶豆對該基因表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：試驗一草魚unc45b基因的全長克隆、生物信息學分析及組織差異表達UNC45b(unc-45 myosin chaperone b)是肌球蛋白的分子伴侶,在肌纖維形成過程中調(diào)控肌球蛋白(粗肌絲)的折疊、組裝和積累,對維持肌節(jié)穩(wěn)定和肌肉發(fā)育起著重要作用。本實驗采用c DNA末端快速擴增法首次克隆獲得草魚unc45b基因全長序列,對其編碼蛋白質(zhì)序列的特性進行預(yù)測和分析,并采用實時熒光定量PCR法檢測草魚各組織unc45b基因的差異表達。結(jié)果表明,草魚unc45b基因全長3163bp,含60 bp的5’端非編碼區(qū)、298 bp的3’端非編碼區(qū)及長2865 bp編碼934個氨基酸的開放閱讀框。草魚unc45b基因編碼的氨基酸序列與斑馬魚、斑點叉尾洶、墨西哥麗脂鯉、尼羅羅非魚和大西洋鮭unc45b的氨基酸序列同源性分別達92%、86%、86%、82%和81%;生物信息學分析顯示草魚unc45b蛋白分子質(zhì)量103,699.8Da,理論等電點7.39,為親水性非分泌蛋白,不含信號肽;其二級、三級結(jié)構(gòu)包括α-螺旋(α-helix)和環(huán)(loop)。組織差異表達結(jié)果顯示unc45b基因在草魚血液、肝臟、脾臟、腎臟、心臟、腦、前腸、鰓、皮膚和肌肉組織中均有表達,尤其在心臟組織中表達量最高,其次是肌肉組織,均顯著高于其他組織(P0.05);在血液、肝臟、脾臟、腎臟、腦、前腸和鰓中僅極少量表達,所得結(jié)果與該基因的功能相一致。試驗二脆化草魚肌節(jié)裝配相關(guān)基因unc45b的時空表達本試驗以投飼配合飼料的草魚為對照組,以干蠶豆浸泡24h后投飼的草魚為試驗組(也稱蠶豆組),對兩組草魚進行為期12周的養(yǎng)殖,并分別于0周、4周、8周、12周采集骨骼肌、心肌、皮膚和肝臟組織,采用實時熒光定量法構(gòu)建各組織unc45b基因m RNA的時空表達譜。結(jié)果表明,骨骼肌和心肌組織中unc45b基因隨著養(yǎng)殖時間的增加表達量顯著降低(P0.05),12周時表達量最低;而皮膚和肝臟組織中unc45b基因隨著養(yǎng)殖時間的增加表達量顯著增加(P0.05),12周時表達量最高,但與骨骼肌和心肌組織相比,皮膚和肝臟組織unc45b基因表達量極低。對脆化草魚和普通草魚0周、4周、8周、12周各組織unc45b基因表達量進行同一時期的組間比較分析,蠶豆組草魚骨骼肌和心肌組織各時期unc45b基因的表達量顯著高于對照組(P0.05);而肝臟和皮膚組織各時期unc45b基因的表達量在兩組間無差異(P0.05)。所得結(jié)果表明,蠶豆和養(yǎng)殖周期均對unc45b基因m RNA表達量有一定影響。隨養(yǎng)殖時間的延長普通草魚和脆化草魚骨骼肌、心肌、皮膚和肝臟unc45b基因m RNA表達量各自均發(fā)生了有規(guī)律的變化。同時蠶豆明顯影響了骨骼肌和心肌組織unc45b基因的表達,所得結(jié)果與unc45b基因的肌節(jié)裝配功能相一致,同時說明蠶豆確實影響了草魚肉質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：unc45b基因 組織差異表達 QRT-PCR 草魚 RACE 生物信息學分析 unc45b基因 蠶豆 養(yǎng)殖周期 組織表達
【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-16
• 1. 普通草魚和脆化草魚10
• 2. 肌肉10-14
• 2.1 肌肉品質(zhì)10-11
• 2.2 肌原纖維11
• 2.3 伴侶蛋白與肌節(jié)裝配與降解11
• 2.4 熱激蛋白 90 (Hsp90)11-12
• 2.5 Unc45蛋白12-13
• 2.6 CHIP蛋白13
• 2.7 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀13-14
• 3. 絲裂原活化蛋白激酶 (MAP K)14-15
• 4. 本論文研究的目的、內(nèi)容和意義15-16
• 4.1 草魚unc45b基因的全長克隆、生物信息學分析及組織差異表達15
• 4.2 脆化草魚肌節(jié)裝配相關(guān)基因unc45b的時空表達15-16
• 第一章 草魚unc45b基因的全長克隆、生物信息學分析及組織差異表達16-42
• 1. 材料與方法17-26
• 1.1 實驗材料17-19
• 1.2 方法19-26
• 2．結(jié)果26-38
• 2.1 unc45b基因全長克隆與序列分析26-30
• 2.2 Unc45b氨基酸序列同源性比對和系統(tǒng)進化樹構(gòu)建30-31
• 2.3 Unc45b蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析31-37
• 2.4 草魚unc45b基因的組織差異表達37-38
• 3. 討論38-41
• 3.1 草魚Unc45b基因與氨基酸同源性比較及系統(tǒng)進化樹構(gòu)建38-39
• 3.2 草魚Unc45b蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)39
• 3.3 草魚unc45b基因組織差異表達39-40
• 3.4 Unc45b蛋白功能40-41
• 4. 小結(jié)41-42
• 第二章 脆化草魚肌節(jié)裝配相關(guān)基因unc45b的時空表達42-56
• 1. 材料與方法43-47
• 1.1 材料來源43
• 1.2 養(yǎng)殖實驗設(shè)計43-44
• 1.3 養(yǎng)殖管理44-45
• 1.4 樣品采集45
• 1.5 實驗試劑與儀器45
• 1.6 各組織總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄45
• 1.7 實時熒光定量PCR測定草魚unc45b基因不同時期的表達45-47
• 2. 結(jié)果47-52
• 2.1 0周、4 周、8 周、12周各時間點魚體體重47
• 2.2 定量反應(yīng)體系檢測47-48
• 2.3 草魚不同組織unc45b基因的時空表達分析 (組內(nèi)分析)48-50
• 2.4 蠶豆對草魚不同組織unc45b基因表達的影響 (組間分析)50-52
• 3. 討論52-55
• 3.1 蠶豆對草魚生長的影響53
• 3.2 unc45b基因的功能53
• 3.3 unc45b基因表達的組織特異性53-54
• 3.4 草魚骨骼肌和心肌組織unc45b基因的時空表達及蠶豆的促表達作用54
• 3.5 草魚肝臟和皮膚組織 unc45b 基因的時空表達54-55
• 4. 小結(jié)55-56
• 全文總結(jié)56-57
• 參考文獻57-63
• 論文發(fā)表63-64
• 致謝64

【相似文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 胡靜;草魚unc45b基因的全長克隆、生物信息學分析及投喂蠶豆對該基因表達的影響[D];上海海洋大學;2016年

  本文關(guān)鍵詞：草魚unc45b基因的全長克隆、生物信息學分析及投喂蠶豆對該基因表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：445581