本文關(guān)鍵詞：中國(guó)河南一先天性無(wú)虹膜家系PAX6基因致病性新突變位點(diǎn)的篩查與驗(yàn)證，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的先天性無(wú)虹膜是臨床較為罕見(jiàn)的先天性遺傳性眼部疾病,特征表現(xiàn)為雙眼虹膜組織發(fā)育不良或正常虹膜組織缺如,部分患者伴發(fā)黃斑及視神經(jīng)發(fā)育不良、白內(nèi)障、青光眼、眼球震顫、弱視、斜視、屈光不正等眼部疾病。研究顯示,PAX6基因與先天性無(wú)虹膜密切相關(guān)。全球范圍內(nèi),先天性無(wú)虹膜發(fā)病率為1/64000~1/96000,無(wú)種族、地區(qū)、年齡、性別差異,其中約2/3患者有家族史,約1/3為散發(fā)。85%先天性無(wú)虹膜為常染色體顯性遺傳,13%伴發(fā)于WAGR綜合癥,2%為常染色體隱性遺傳。資料與方法收集2014年8月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院眼二科就診的一個(gè)先天性無(wú)虹膜三代家系,共9名成員,其中男性患者2例,女性患者3例,正常家系成員4名。采集9名家系成員血樣,同時(shí)隨機(jī)搜集100名與本家系無(wú)關(guān)的正常健康體檢者。所有參與研究人員進(jìn)行詳細(xì)的全身檢查,排除全身系統(tǒng)性疾病,進(jìn)行詳細(xì)的眼部檢查,采集眼底、眼前節(jié)照相等。使用酚-氯仿法提取血樣中的DNA,根據(jù)PAX6基因的14個(gè)外顯子設(shè)計(jì)引物,進(jìn)行特定片段的PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳純化,進(jìn)行雙向DNA測(cè)序。使用DNAStar軟件分析測(cè)序結(jié)果。使用Gene JET RNA純化試劑盒提取血樣淋巴細(xì)胞中的RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。利用Maxima SYBR Green qPCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)定量熒光PCR。以β-肌動(dòng)蛋白基因作為參照。配制體系,加樣,使用Mx3000P實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀軟件讀取數(shù)據(jù)。結(jié)果該家系的遺傳方式為明顯的常染色體顯性遺傳,所有患者均表現(xiàn)為單純的眼部異常不伴有任何全身或其他系統(tǒng)性疾病。家系中5例患者臨床表現(xiàn)相似,包括先天性無(wú)虹膜、畏光、眼球鐘擺樣水平震顫,其中3例成年患者患白內(nèi)障,2例患兒未患白內(nèi)障。使用DNAStar軟件分析測(cè)序結(jié)果,發(fā)現(xiàn)該家系中所有患者的PAX6基因10號(hào)外顯子發(fā)生移碼突變,第796位脫氧核糖核苷酸G缺失(c.796 delG),導(dǎo)致產(chǎn)生提前終止密碼子,但家系正常成員及100名對(duì)照者均不存在此突變。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)比較,家系中先天性無(wú)虹膜患者PAX6基因mRNA的水平比家系中正常人PAX6基因mRNA的水平降低約50%。結(jié)論1.本研究中我們發(fā)現(xiàn)了PAX6基因中的一個(gè)新的突變位點(diǎn)(c.796 del G,p.A266fs)導(dǎo)致移碼突變,編碼同源結(jié)構(gòu)域基因序列中出現(xiàn)提前終止密碼子,導(dǎo)致脯氨酸-絲氨酸-蘇氨酸的結(jié)構(gòu)域缺失。2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR發(fā)現(xiàn),突變的PAX6基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的m RNA比正常人少近50%,與PAX6基因單倍劑量不足是先天性無(wú)虹膜的表型基礎(chǔ)的理論相一致。3.這個(gè)發(fā)現(xiàn)不僅擴(kuò)增了PAX6基因的突變譜,進(jìn)一步驗(yàn)證了PAX6基因在眼球發(fā)育過(guò)程中的重要作用,同時(shí)也對(duì)先天性無(wú)虹膜的分子生物學(xué)研究、基因咨詢、產(chǎn)前診斷等提供參考。
【關(guān)鍵詞】：先天性無(wú)虹膜 PAX6基因 移碼突變
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R773.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 中英文縮略詞表12-13
• 引言13-14
• 材料與方法14-20
• 1. 主要儀器、試劑與耗材14-15
• 2. 研究對(duì)象及方法15-20
• 結(jié)果20-24
• 1. 家系成員的一般表現(xiàn)20-21
• 2. PCR擴(kuò)增產(chǎn)物比較21
• 3. DNA測(cè)序分析結(jié)果21-23
• 4. 兩個(gè)組PAX6基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR檢測(cè)比較23-24
• 討論24-27
• 參考文獻(xiàn)27-30
• 綜述 先天性無(wú)虹膜30-54
• 概述30
• 1.臨床表現(xiàn)30-34
• 2.分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)34-41
• 3.臨床治療進(jìn)展41-46
• 展望46-47
• 參考文獻(xiàn)47-54
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果54-56
• 致謝56-57

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本文編號(hào)：426882